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五指毛桃种苗繁育技术探究 　　摘要 切取五指毛桃0.2 mm茎尖作为外植体，研究其科学合理的种苗繁育体系。结果表明：最佳诱导培养基为MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，诱导率为55%；最佳增殖培养基为MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.2 mg/mL+蔗糖30 g/L+琼脂5 g/L，增殖倍数为4.8倍；最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.25 mg/mL+活性炭0.3 g/L，生根率为95% 关键词 五指毛桃；茎尖；组织培养；培养基 中图分类号 S662.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）03-0063-01 五指毛桃原植物为桑科叶榕Ficus hirta Vahl，又名五爪龙、五指牛奶、土北芪等，分布于我国西南部至东南部。其味辛、甘，性平，主治脾虚浮肿，食少无力，肺痨咳嗽，盗汗，带下，产后无乳，风湿痹痛，水肿，肝硬化腹水，肝炎，跌打损伤[1-2]。现代研究表明：五指毛桃水提物具有消化系统保护作用、平滑肌调节作用、抗氧化作用、杀菌抗炎作用，还能提高免疫功能[3-4]。五指毛桃还是药食同源的珍品，具有平肝明目，滋阴降火，健脾开胃，益气生津，祛湿化滞，清肝润肺等作用。五指毛桃始载于清朝《生草药性备要》，是一个多民族使用的民间草药，瑶、傣、侗、壮、黎、哈尼、景颇等多个民族的民间药书中都有记载。随着现代人们生活水平的提高，保健意识增强，市场对五指毛桃药材及深加工产品的需求量与日俱增，年用量超过 1万t 五指毛桃市场供应基本依靠采挖野生资源。由于农民掠夺式的采挖，同时其自然繁殖能力弱，致使野生资源越来越少。五指毛桃为小灌木，分枝少，单株药材产量低，需要高密度种植才能取得较高的经济效益，用种量2.7万株/hm2，若种苗的价格过高，容易造成投资大于产出，这是人工种植至今无法顺利开展的主要原因。因此，培育出高性价比的种苗，是开展五指毛桃规模化人工种植的关键 1 材料?c方法 1.1 试验材料 材料来自桂林亦元现代技术有限公司建立在兴安漠川乡的种源基地 1.2 试验方法 1.2.1 外植体处理。选择连续3 d晴天的上午，采集健壮、无病虫害的当年生顶芽作为外植体。去掉叶片，剪成3～5 cm，放置灭菌瓶中，用流动水冲洗15 min。在超净工作台上，用75%酒精浸泡消毒30 s，再用0.1%升汞浸泡灭菌6～8 min，用无菌水冲洗4～6次，备用[5] 1.2.2 初代培养。在显微镜上用顶芽切取0.2 mm的茎尖，转接到初代培养基中：MS+BA 0.3～1.1 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL、MS+KT 0.5 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL，以外植体出芽时间、出芽率为指标，筛选出最佳诱导培养基 1.2.3 继代培养。将初代诱导出的丛生芽剪切成单芽或带腋芽的茎段，转接到继代培养基中MS+BA 0.5～0.8 mg/mL+NAA 0.1～0.3 mg/mL。培养1个月后记录苗的生长情况和增殖倍数，筛选出最佳的继代增殖培养基[6] 1.2.4 生根培养。将继代苗剪成单芽或带腋芽的茎段，转接到生根培养基中1/2MS+NAA 0.25～1.00 mg/mL，每组处理20瓶，每瓶转接15株，培养1个月后记录苗的生长情况、生根数量、生根的质量，筛选出最佳的生根培养基 以上培养基均添加3%蔗糖，琼脂5 g/L，pH值5.8～6.0；生根培养基另外还添加活性炭3 g/L。培养温度为（25±2） ℃，光照强度1 800～2 000 lx，光照时间10 h/d；另外，生根培养先暗培养5～7 d后进行光照培养 2 结果与分析 2.1 不同初代培养基对五指毛桃萌芽的影响 切取茎尖接到初代诱导培养基中，5 d左右开始膨大，20 d后变绿色，长丛生芽。从表1可以看出，在BA、KT浓度相同的情况下，BA的诱导率比KT高，效果较好；当BA浓度为0.3～0.5 mg/mL时，诱导率随着浓度的增加而增加，且苗生长正常；当BA浓度为0.8～1.1 mg/mL时，诱导率随着浓度的增加而降低，外植体愈伤较大，且苗有玻璃化、褐化。因此，最佳的诱导培养基是MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.1 mg/mL 2.2 不同继代培养基对五指毛桃增殖的影响 从表2可以看出，在浓度为BA 0.5 mg/mL时，随着 NAA用量的增加，倍数也增加，但当NAA浓度达到0.3 mg/mL，苗开始出现玻璃化。在浓度为BA 0.8 mg/mL时，随着NAA用量的增加，增殖倍数反而降低。因此，最佳的增殖继代培养基是MS+BA 0.5 mg/mL+NAA 0.2 mg/mL 2.3 不同生根培养基对五指毛桃生根