国产PCR试剂及COBAS系统血清HBV―DNA检测结果不一致原因探析.docVIP

国产PCR试剂及COBAS系统血清HBV―DNA检测结果不一致原因探析 　　[摘要] 目的 探?国产PCR试剂和COBAS系统血清HBV-DNA检测结果不一致的原因。 方法 收集2013年12月～2015年10月来本院肝病中心就诊的慢性HBV感染者230例，国产PCR试剂血清HBV-DNA结果均为阴性，应用COBAS系统予以复查，分析两种方法HBV-DNA检测结果的差异及可能的影响因素。 结果 106例（46.09%）患者两种方法血清HBV-DNA检测结果均低于检测下限；124例（53.91%）患者在COBAS系统可检测到不同载量的HBV-DNA，包括3例（1.30%）隐匿性HBV感染。随着患者血清HBV-DNA载量的增加，性别比、HBeAg效价和阳性率、血常规和凝血功能等指标差异均无统计学意义（P0.05），但血清HBsAg效价、终末期肝病构成比、肝功能酶类指标、AFP等逐渐升高（P0.05）. But serum HBsAg valence， end-stage liver disease ratio， liver function enzyme index， and AFP were gradually increased（P 　　[Key words] Hepatitis B； DNA； End-stage liver disease； COBAS Taqman System； Fluorescent quantitative PCR 慢性 HBV 感染是导致我国终末期肝病的主要病因[1]，HBV-DNA 定量测定能准确地反映病毒复制程度[2]，对慢乙肝相关疾病的诊疗、监测及预后的评估均十分重要[3]。近年来国产 HBV-DNA 检测试剂由于采用了可靠的质量管理体系，同时卫计委要求PCR实验室均采用评审准入制度，国产PCR试剂用于慢乙肝患者血清HBV-DNA的检测基本可以满足临床需求[4]。但由于与国际参考方法（COBAS系统）在样本用量、内标、引物等方面存在差异[5]，导致灵敏度和准确性稍有欠缺。本文应用COBAS系统对230例国产PCR试剂血清HBV-DNA检测结果阴性的患者予以复查，分析两者结果不一致的可能原因，并为检测方法的合理应用提供依据 1 资料与方法 1.1 一般资料 本研究230例患者均为2013年12月～2015年10月来本院肝病中心就诊的慢性HBV感染者，所有患者的诊断标准均符合《慢性乙型肝炎防治指南》（2015版）[6]，HBsAg和（或）HBV-DNA阳性6个月以上，除外其他肝炎病毒感染、酒精性肝病、药物性肝病、自身免疫性肝病者。其中男167例，女63例，年龄17～81岁，平均（55.67±12.74）岁，将所有患者按血清HBV-DNA水平（COBAS系统）高低分为三组，A组106例（1.00×103 IU/mL），三组的年龄和性别比例均无明显差异，具有可比性 1.2 检测方法及观察指标 所有患者首次血清HBV-DNA检测均采用国产 PCR 试剂，仪器为美国 ABI 7500 型荧光定量 PCR 仪。检测结果当日回报给临床医生，当怀疑与临床实际不相符时，当日或次日再次采血用 Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan 48 系统及配套试剂（简称COBAS系统）复查 HBV-DNA。同时检测患者 HBV 血清标志物、肝功能、血常规、凝血功能和甲胎蛋白（AFP）等可能影响血清HBV-DNA的指标，HBsAg和HBeAg效价采用ABBOTT雅培AXSYM i2000全自动免疫分析仪及配套试剂，肝功能检测采用 Siemens ADVIA2400 全自动生化分析仪及配套装试剂，血常规检测采用 Sysmex i2000全自动血液分析仪和配套试剂，凝血功能检测采用 ACL TOP 全自动凝血分析仪和配套试剂，甲胎蛋白检测采用Siemens ADVIA Centaur XP全自动免疫分析仪和配套试剂 1.3 统计学方法 采用SPSS 16.0 软件，正态分布的计量资料以均数±标准差（x±s）表示，多组均数比较采用方差分析；偏态分布的计量资料采用中位数（四分位数）表示，多组均数比较采用非参数检验；计数资料采用例数和率表示，率的比较采用χ2检验。采用Spearman相关分析各指标之间的相关性。P1.00×103 IU/mL，随着血清HBV-DNA的增加，患者的年龄、性别比例、HBeAg效价和阳性率、TBil、血常规和凝血功能指标差异均无统计学意义（P0.05），但血清HBsAg效价、终末期肝病构成比、DBil、TP、肝功能酶类指标（包括ALT、AST、ALP、GGT等）、AFP逐渐升高（P 　　为分析哪些患者容易出现国产PCR试剂检测阴性而CO