基于磁性纳米粒子固定辣根过氧化物酶的生物传感器.pdfVIP

÷ ／’ 首届西部地区分析化学学术研讨会论文集 | ＼／基于磁性纳米粒子固定辣根过氧化物酶的生物传感器 袁永海 李建平。 陈绪胄 (桂林工学院材料与化学工程系，广西桂林，541004) 辣根过氧化物酶(Horseradish 血红素为氧化还原中心的蛋白质．在细胞代谢的氧化还原过程中起着重要作用。本文首次利用3．氨丙基-3- 乙氧基硅烷(APS)和戊二醛溶液将辣根过氧化物酶共价固定在磁性纳米粒子表面，通过磁力将其修饰于 固体石蜡碳糊电极表面制成了酶修饰电极(简称MHRP／SCP修饰电极)，该传感器对过氧化氢的检出限达 4．5xlO喝mol／L。利用该方法所固定的酶具有稳定好，活性高等特点，而且文中提到的制备修饰电极的方 法也是十分新颖的，有望在流动分析体系及医学等领域得到广泛的应用。 1实验部分 1．1磁性辣根过氧化物酶的合成 氨丙基-3-乙氧基硅烷(APS)和戊二醛溶液将辣根过氧化物酶共价固定于该磁性纳米粒子表面，从而制得 磁性辣根过氧化物酶。 1．2 MFIRP／SCP修饰电极的修饰过程 用一磁铁吸住固体石墨碳糊电极的铁棒上端，把电极的另一端置于搅拌着的含固定浓度MHRP纳米粒 子的溶液中，吸附一定时间(吸附量由吸附时间决定)．电极的石墨碳糊膜一端就吸附上一层MHRP纳米 粒子；把电极置于轻轻搅动的蒸馏水中清洗3min，备用．每次使用后，移去磁铁，用蒸馏水冲洗，洗去 HHRP纳米粒子以更新电极． 1．3实验方法 在25mL比色管中加入一定量过氧化氢溶液，再加入PBS缓冲溶液(pH一7．0)S．OmL．加入一定量 的kr-e(CN)6，稀释至刻度；转入2SmL的小烧杯中，以MHRP／SCP修饰电极为工作电极，测量加与未加 过氧化氢时的氧化还原电流的变化彳I，扫描范围为过氧化氢-0．20．6V：在不断搅拌电解液情况下进行计 时安培法实验，工作电位为0mV． 2结果与讨论 2．1磁性纳米粒子及MBRP的性质表征 子状微粒的粒径大约为1S Fe304纳米粒子的磁滞回线测得比饱和磁化强度为l-89 emu／g,矫顽力较低，说明磁性普鲁士蓝纳米粒子 具有良好的磁学性能，且基本无剩磁和磁滞现象，表现为超顺磁性，可用于借助外磁力从溶液中进行纳米 磁性颗粒的分离． 3100 ·逼讯联系人lE-mail：likianping@263．t圮t 基金项目t广西教育厅科研基金资助t桂教科2004【22】 首届西部地区分析化学学术研讨会论文集 下，我们已经将HRP固定在Fe304纳米粒子表面并能很好地保持其生物结构。 2．2实验条件的优化 mol／L的K4Fe(CN)6，pH 2．3MHRPISCP修饰电极对过氧化氢的电催化特性 将MHRP／SCP修饰电极放入0。020moVLPBS(pH,-,Z0)，2．5x10_moVLK4Fe(CN)6的电解液中，多次 循环扫描后得到稳定的循环伏安曲线如图1所示，在0．2v(vs 这说明HRP已成功地固定在磁性纳米粒子表面并能催化Hz02在电极上发生还原反应。 ● 。 堇 ： 。 ．2 a■0．4 O工O山4量 E，1， 图I过氧化氢在MHRP／SCP电极上的安培响应 2．4安培响应 V，记录在含0．1 7．0的磷酸盐 以MHRP／SCP修饰电极为工作电极，极化电位为一0．05 mol／LKCI、pH 缓冲溶液中得到的HzOz计时安培曲线．实验结果显示MHRP／SCP修饰电极对