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脂肪干细胞来源的生长因子对皮肤成纤维细胞迁移和增殖的影响 华中科技大学同济医学院附属协和医院口腔科 硕士研究生：赵佳佳 指导老师：张汉东教授 陈莉莉教授 摘要 背景：脂肪干细胞条件培养液（adipose stem cell-conditioned medium，ASC-CM ） 中富含各类脂肪干细胞（adipose stem cells，ASCs ）来源的细胞因子。目前研究 证实，ASC-CM 可以促进皮肤创伤修复，皮肤成纤维细胞是一类几乎参与整个 创伤修复过程的重要效应细胞，其迁移与增殖是创伤修复首要的关键环节。 目的：研究ASC-CM 中表皮生长因子（EGF ），血小板源性生长因子（PDGF ）， 血管内皮生长因子（VEGF ），成纤维细胞生长因子（bFGF ）在创伤愈合过程中 对皮肤成纤维细胞迁移和增殖的作用机制。 方法：（1）采用蛋白芯片技术，检测ASC-CM 中包括EGF 、PDGF 、VEGF 以及 bFGF 在内的507 种细胞因子的含量（信号值，SV）；（2 ）采用划痕实验和transwell 小室迁移实验，在 ASC-CM 中分别加入 0、1、10、20 、50、100ng/ml 浓度的 EGF 、PDGF 、VEGF 和bFGF ，上述各因子的中和抗体，及上述单一因子诱导皮 肤成纤维细胞迁移24h 后，检测其迁移率；（3 ）采用CCK-8 实验，诱导皮肤成 纤维细胞增殖3d 后，检测其增殖率，分组同上。 结果：（1）ASC-CM 中EGF （SV=458.0）、PDGF （SV=363.5）、VEGF （SV=360.5 ）、 以及bFGF （SV=389.5）信号值均大于300 ；（2 ）相较于单一因子，ASC-CM 对 成纤维细胞的迁移有明显的促进作用。其中，PDGF 、VEGF 和bFGF 对细胞迁 移的促进作用显著，且随着浓度的上升而增加，PDGF 在50ng/ml 时、VEGF 在 20ng/ml 时、bFGF 在 20ng/ml 时达到各自的平台期；在 ASC-CM 中分别加入 PDGF 、VEGF 和bFGF 的中和抗体后，促进作用可被明显抑制；（3 ）相较于单 2 一因子，ASC-CM 对成纤维细胞的增殖有明显的促进作用。其中，EGF 和bFGF 对细胞增殖的促进作用显著，且随着浓度的上升而增加，并分别在 50ng/ml 和 20ng/ml 时达到平台期；在ASC-CM 中分别加入EGF 和bFGF 的中和抗体后， 促进作用可被明显抑制。 结论：相较于单一因子，ASC-CM 可明显促进皮肤成纤维细胞的迁移和增殖， 其中所含有的PDGF 、VEGF 和bFGF 对细胞迁移促进作用非常明显，且具有浓 度依赖性；EGF 和 bFGF 对细胞增殖促进作用非常明显，且具有浓度依赖性。 因此ASC-CM 对皮肤创伤修复的促进作用优于单一因子；同时，在应用ASC-CM 时应注意选择适宜的细胞因子浓度，可更有效地促进成纤维细胞的迁移和增殖。 【关键词】脂肪干细胞条件培养液；表皮生长因子；血小板源性生长因子；血 管内皮生长因子；成纤维细胞生长因子 3 Abstract Background ：Although adipose stem cell-conditioned medium (ASC-CM) has been demonstrated the effect on promoting the cutaneous wound healing, the mechanism for this response on the effector cells (like dermal fibroblast) during the process remains t