《生物化学》周爱儒第六版第二章核酸的结构及功能.pptVIP

核酸的发现和研究工作进展 1868年 Fridrich Miescher从脓细胞中提取“核素” 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质 1953年 Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构 1968年 Nirenberg发现遗传密码 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶 1981年 Gilbert和Sanger建立DNA 测序方法 1985年 Mullis发明PCR 技术 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP) 1994年 中国人类基因组计划启动 2001年 美、英等国完成人类基因组计划基本框架 腺嘌呤Adenine 鸟嘌呤guanine 尿嘧啶uracil 胞嘧啶cytosine 胸腺嘧啶thymine 嘌呤碱和嘧啶碱分子中都含有共轭双键体系，在紫外区有吸收（260 nm左右）。 酮式烯醇式互变异构 组成核酸的戊糖有两种。 C-N糖苷键 核酸中也存在一些不常见的稀有碱基。 2.核苷酸的重要衍生物 （2）cAMP 和 cGMP 细胞信息传递的重要信使。 一.DNA的二级结构 1953年，Watson和Crick根据DNA结晶的X-衍射图谱和分子模型，提出了著名的DNA双螺旋结构模型。 一. mRNA mRNA的结构特点: 真核细胞mRNA的3’-末端有一段长达200个核苷酸左右的聚腺苷酸(polyA)，称为尾结构。 （参与mRNA从细胞核到细胞质的转移；与其半寿期有关。） 5’ -末端有一个甲基化的鸟苷酸，称为帽结构。 （与翻译与mRNA的稳定有关。） 2. tRNA的三级结构——倒L型 三. rRNA RNA的高级结构特点 RNA是单链分子，因此，在RNA分子中，并不遵守碱基种类的数量比例关系，即分子中的嘌呤碱基总数不一定等于嘧啶碱基的总数。 RNA分子中，部分区域也能形成双螺旋结构，不能形成双螺旋的部分，则形成突环，即“发夹型”结构。 在RNA的双螺旋结构中，碱基的配对不如DNA中严格。G 除了可以和C 配对外，也可以和U 配对。不同类型的RNA, 其二级结构有明显的差异。 tRNA中存在较多的稀有碱基，大部分位于突环部分。 二．核酸的两性性质及等电点 与蛋白质相似，核酸分子中既含有酸性基团（磷酸基）也含有碱性基团（氨基），因而核酸也具有两性性质。 由于核酸分子中的磷酸是一个中等强度的酸，而碱性（氨基）是一个弱碱，所以核酸的等电点比较低。如DNA的等电点为4～4.5，RNA的等电点为2～2.5。 RNA的等电点比DNA低的原因，是RNA分子中核糖基2′-OH通过氢键促进了磷酸基上质子的解离。DNA没有这种作用。 三. 核酸的水解 （1）酸或碱水解 DNA和RNA对酸或碱的耐受程度有很大差别。 如：在0.1 mol/L NaOH溶液中，RNA几乎可以完全水解，DNA在同样条件下则不受影响。（这种水解性能上的差别，与RNA核糖基上2′-OH的邻基参与作用有关。在RNA水解时，2′-OH首先进攻磷酸基，在断开磷酯键的同时形成环状磷酸二酯，再在碱的作用形成水解产物。） （2）酶水解 生物体内存在多种核酸水解酶。 DNA水解酶（DNases）、RNA水解酶（RNases）。 核酸外切酶和核酸内切酶。 限制性核酸内切酶：水解核酸中某些特定碱基顺序的部位。 四. 核酸的变性、复性和杂交 1. 核酸的变性：指核酸双螺旋区的多聚核苷酸链间的氢键断裂，变成单链结构的过程。 核酸的变性并不涉及磷酸二酯键的断裂，所以它的一级结构(碱基顺序)保持不变。 变性核酸：OD260增高，粘度下降，浮力密度升高，失去其部分或全部的 生物活性。 增色效应——核酸变性后，其在260 nm处的紫外吸收值将增加。 DNA约增加25－40%；RNA约增加1.1%。 核酸变性的因素：温度升高、酸碱度改变、甲醛和尿素等的存在均可引起核酸的变性。 DNA的热变性 DNA的变性过程是突变性的，在很窄的温度区间内完成。因此，通常将引起DNA变性的温度称为融点（解链温度、融解温度、Tm ）。 Tm：DNA热变性达到一半时候的温度。 G和C的含量高，Tm值高：（G+C)%=(Tm-69.3)X2.44 2. 复性 ——变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。 DNA复性后，一系列性质将得到恢复，但是生物活性一般只能得到部分的恢复。 DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关。 将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时