特异性抑制环氧合酶-2表达siRNA筛选.PDFVIP

·论 著 · 特异性抑制环氧合酶-2 表达的siRNA 筛选 沈雁a a a b a* ，李瑞 ，范达 ，李谦 ，涂家生 ( 中国药科大学，a.药剂学教研室；b.生命科学院，南京 210009) 珺 摘要：目的 筛选有效抑制环氧合酶-2(COX-2)表达的小干扰RNA(siRNA)序列，并观察其对细胞中COX-2 表达的抑制作 用。方法 设计针对COX-2 的3 对(siRNA24 ，siRNA954 ，siRNA1553)及一条FAM 荧光标记的阴性对照siRNA(称为HK) 。 在Lipofectamine2000 介导下转染人胃癌细胞系 SGC-7901。同时采用RT-PCR 法和Western blot 方法检测细胞中COX-2 含量，以β-actin 蛋白做内参照。结果 当Lipofectamine2000 浓度在50 μmol·L1 时能实现最大转染效果。与其他各组相 比，转染了siRNA954 的人胃癌细胞中，编码COX-2 mRNA 的含量明显减少(P0.01) 。结论 成功设计了针对COX-2 的 siRNA ，并从中筛选出siRNA954 ，能够有效抑制人胃癌细胞COX-2 表达，为肿瘤治疗及其临床应用奠定了基础。 关键词：环氧合酶-2 ；siRNA ；RT-PCR ；转染 中图分类号：R963 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2012)05-0377-04 Selection of Specific siRNA Inhibiting the Expression of COX-2 a a a b a* SHEN Yan , LI Ruijun , FAN Da , LI Qian , TU Jiasheng (China Pharmaceutical University, a.Department of Pharmaceutics; b.School of Life Science and Technology, Nanjing 210009, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To select the siRNA which could most effectively inhibit the expression of COX-2, and to observe the change of COX-2 expression in cells. METHODS Three siRNAs were designed(siRNA24, siRNA954, siRNA1553) and one FAM fluorescence-labeled siRNA was used as a negative control(HK). Detect the effect of inhibition by RT-PCR and Western blot after transfecting human gastric cancer cell line SGC-7901. RESULTS The 50 μmol·L1 Lipofectamine2000 had highest transfection effiency. The expression of human COX-2 gene was suppressed specific and effectively by siRNA954, compared with other groups(P0.01). CONCLUSION siRNA954 can inhibit COX-2 expression effectively. It plays an important role in the treatment of tumor. KEY WORDS: COX-2; siRNA; RT-PCR; transfection 肿瘤发病率及死亡率在我国均很高，就诊时 功能的调节，COX-2 在大多数组织中表达较低或 大多已