共沉淀技术研究进.PDFVIP

维普资讯 第 13卷第 12期 中 医 药 导 报 2007年 12月 Vo1．13 No．12 GuidingJournalofTCM December．2007 免疫共沉淀技术的研究进展 StudyProgressofCo—-immunoprecipitation Technology 郭纯 (湖南省人民医院，湖南 长沙 410005) [摘要] 免疫共沉淀(CO—immunoprecipitation)技术是检测蛋 白质问相互作用的经典方法，也是较常用的方法。文章对 近 1O余年有关免疫共沉淀技术的原理和应用及其优缺点的分析进行文献综述。 [关键词] 免疫共沉淀；蛋白质；相互作用；技术 [Abstract] Co—immunoprecipitationtechnologyisclassicalme~odtoexaminetheinteractionmaongproteins，alsoacommon method．Thepapermadealiteraturereview，whichreferredtotheprincipleofCO—in~munoprecipitationtechnologyanditsmeritor flaw． [Keyw0rds] Co—immunoprecipitation；Protein；Interaction；Technoloyg [中图分类号]R392—33 [文献标识码]A [文章编号]1672—951X(2007)12—0086—04 蛋白质问的相互作用控制着大量的细胞活动事件，如细 胞。刮去每块板上的细胞到 1ml冰冷的EBC裂解缓冲液 胞的增殖、分化和死亡。通过蛋白质问相互作用，可改变细 中。 胞内蛋白质的动力学特征。如底物结合特性、催化活性 ；也 1．1．2 将每毫升细胞悬液转移到微量离心管中，在微量离 可产生新的结合位点，改变蛋 白质对底物的特异性；还可失 心机上4℃以最大速度离心 15min。 活其它蛋白质，调控其它基因表达。因此，只有使蛋白质问 1．1．3 收集上清(约3Orn1)并加入3O 的适当抗体，4℃ 相互作用顺利进行，细胞的正常生命活动过程才有保障。由 摇动免疫沉淀物 Ih。 于蛋白质问相互作用具有如此重大的意义，因此其检测方法 1．1．4 加入0．9ml的蛋白质A—Sepharose悬液，4℃摇动 的研究也备受重视 由生化方法。如蛋 白质亲和层析(protein 免疫沉淀物30rain。 affinitychromatography)、亲和印迹 (affinityHoning)、免疫沉 1．1．5 用含900mmol／LNaC1的NETN洗蛋白A—Sepharose 淀(immunoprecipitation)及交联(cross—unking)，发展到当今 混合物，再重复洗5次。最后，用 NETN洗 1次。 的分子生物学方法 ，如以基因文库为基础的蛋 白探测(pro— 1．1．6 吸出混合物的液体部分。加入800 的1xSDS胶 teinprobing)、噬菌体显示 (phagedisplay)及双杂交系统(two 加样缓冲液到球珠中，煮沸4min。 — hybridsystem)等。另外，还发展了可定性和定量检测蛋白 1．1．7 将样品加入到大孔的不连续SDS—PAGE梯度胶中， 质问相互作用的简便又快捷的方法 ，如表面胞质团共振 (Sill- 在 10mA的恒定电流下电泳过夜。 facepl~smonresonance)等。通过这些方法的联合使用，实验 1．1．8 通过考马斯蓝染色观察蛋白质泳带。 得出的蛋白质问的相互作用的结论显得更为可靠 J。 1．1．9 从胶上切下目标带，将其放到微量离心管中，用1Inl 1 免疫共沉淀基本原理 50％乙腈洗两次，每次3min。