獭兔MMP2基因外显子1与10的多态性分析.PDFVIP

附件一：详细摘要模板 獭兔MMP2 基因外显子1和10 的多态性分析※ 1,2※※ 3 1,2 4 陈赛娟 ，刘 涛 ，黄玉亭 ，董 兵 （1.河北农业大学山区研究所，河北保定 071001；2.河北省山区农业工程技术研究中心，河北保定 071001； 3.瑞普(保定)生物药业有限公司，河北保定 071000；4.河北农业大学科学技术研究院，河北保定 071001） 引言 为了寻找与獭兔被毛密度高度相关的分子标记，本课题组在前期利用家兔全基因表达谱芯片，筛选 出了多种在不同被毛密度獭兔皮肤组织中差异表达的基因，部分参与细胞增殖、分化、凋亡和迁移的基 因表达水平发生了明显改变，如：MMP2、TGFβ、IGF-1B、BMP2、CDK2、CCNA2 等，其中MMP2 基因在毛密组獭兔皮肤组织中高表达，是毛稀组的8.195倍；CCNA2 基因在毛密组獭兔皮肤组织中低 [1-2] 表达，是毛稀组的0.143倍 。本课题组选择CCNA2 基因作为候选基因，进行了多态性分析，筛选出 了T549G 和G748A 两个与獭兔被毛密度相关的单核苷酸多态性位点，确定了与被毛密度相关的遗传标 [3] 记基因型 。本试验拟选择MMP2 基因作为候选基因，对MMP2 基因外显子1和10进行多态性分析。 材料与方法 分别设计并合成用于扩增MMP2基因外显子1和10 的引物序列，外显子1:F:5-AGTCTAGGCAAT CGAAAGAGC GGA CC-3，R:5-TCG GAAAGTTCGACT CAA CTT GGCTC-3；外显子 10:F:5-TTG GTCTGATTTATTTCATTTCCACTC GT-3，R:5-CAGTCTCCCAGGTGACGC CCATGTTT-3。选 [4] 择同日龄在相同条件下饲养管理的白色獭兔群，在 100 日龄时测定其背中部被毛密度 ，将兔群按被毛 密度分为毛稀组和毛密组，每组选出50 只獭兔，组内公母各半，分别从100 只獭兔的耳缘静脉采集血 液样品，加入EDTA·Na 抗凝。提取血液中的DNA，分别进行MMP2 基因外显子 1和外显子10 的PCR 2 扩增和测序。 结果与讨论 经琼脂糖凝胶电泳鉴定表明，用血液DNA 提取试剂盒从96 只獭兔的血液样品中成功抽提出DNA， 并分别扩增出了与目的基因片段长度相当 （338bp 和400bp）的扩增产物，回收纯化PCR 产物并进行序 列测定，从测序结果中分别提取出每个序列中段长156bp 的MMP2基因外显子1序列和137bp 的MMP2 基因外显子10序列，对序列进行比对后发现，96 只獭兔的MMP2 基因外显子 1序列和外显子 10序列 均完全相同，未发现多态性位点。本课题组后续将继续对MMP2 基因的其它外显子进行多态性分析。 主要参考文献 [1]Chen S.J,Liu T,LiuY.J,etal.,Geneexpressionpatternsin differentwool densitiesofRexrabbitusingcDNAmicroarray.Agr. Sci. China.2011, 10(4):595-601. [2] . [J]. 2011 42(6) 790-796. 陈赛娟，谷子林，董兵，等 不同被毛密度獭兔的皮肤组织差异表达基因研究 畜牧兽医学报， ， ： [3]Chen S.J,Liu T,LiuY.J,etal.,Identification of singlenucleotidepolymorphismsin the CCNA2 gene anditsassociation with wooldensityinRexrabbits.Genet.Mol.Res.2011, 10(4):3365-3370. [4] . [J]. 1999 4 18-21.