2.常规病理检查分析.pptVIP

常规组织病理学技术;固 定;组织固定;组织固定;组织固定;组织固定;组织固定;组织固定;常用固定液介绍;甲醛（分子式:HCHO）固定: 纯甲醛是一种蒸汽 溶于水后成为37%~40%的甲醛溶液（又称福尔马林溶液） 固定液为10%的中性福尔马林（即约含4%W/V的甲醛溶液） 甲醛在水溶液中形成HOCH2OH（亚甲基氢氧化合物）复合物;甲醛（分子式:HCHO）固定: 甲醛的亚甲基氢氧化合物能与蛋白质末端多种不同的功能基团结合，使蛋白多肽分子间形成桥键，使蛋白质不再发生改变，保存原位。 -;甲醛（分子式:HCHO）固定的优点: 组织形态结构保存好 固定均匀，穿透性强 组织收缩少 增加组织硬度，便于切片 价格便宜 ;甲醛（分子式:HCHO）固定的缺点: 封闭抗原决定簇： 醛基与抗原蛋白氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的空间构象发生改变，可能部分和完全遮盖抗原决定簇，使之不能完全暴露，导致免疫组织化学染色产生假阴性。 处理措施： 固定后能够充分水洗，可减少分子间交联。 抗原修复还可使抗原再现。 缩短固定时间(8～24小时)，降低固定温度(4℃)可减少交联。;甲醛（分子式:HCHO）固定的缺点: 甲醛内杂质含量多，影响酶染色 含甲酸，固定液酸化，影响染色 产生甲醛颗粒，影响观察，尤以多血的肝，脾组织常见 易挥发，污染环境;10%中性缓冲福尔马林固定液： 100ml40%福尔马林 900ml蒸馏水 NaH2PO4 4g Na2HPO4 6.5g 最常用的固定液，抗原保存好，合适免疫组化染色。;优点：--保存组织中易溶于水的物质，如尿酸结晶和糖原---常与其他试剂配制成多种混合固定液：加快固定时兼有脱水的作用缺点：--可溶解脂类物质，要求保留脂类物质时不能使用酒精--对组织收缩较大，单纯酒精固定组织收缩明显，变硬变脆，制片困难--渗透力差，组织表面已固定，组织中间固定不佳--沉淀核蛋白，球蛋白，白蛋白，影响核染色--价格贵;醋酸（Ａcetic acid）固定--对染色质固定较好。---对脂肪、糖元不能固定。-- 能使组织膨胀，可抵偿因乙醇、升汞、甲醛等固定液引起的组织收缩和硬化，故常配成5%混合固定液。-- 穿透速度最快，固定时间短。-- 5％醋酸的pＨ值在2≈8，此时可停止细菌和酶的活动，可防止组织自溶变性。;--能沉淀蛋白质，它不能固定脂肪、类脂和糖类。--穿透力较弱，单独使用可使组织收缩。多与醋酸和铬盐（重铬酸钾）配成混合固定液。--固定后细胞的结构，特别是核的细微结构显示清晰。--易产生汞盐的沉着，损害切片刀，因此染色前必须脱汞。;--能沉淀蛋白质，但对脂肪和类脂无固定作用。--穿透力很慢，细胞收缩显著，但不会使组织硬化。--有软化皮肤的作用，配制的Bouin氏液对头皮及全身皮肤制片效果甚好。--固定时间太久会影响HE染色。--糖元较好的固定剂。;--可以作固定剂，又可作脱水剂，穿透速度快，可使蛋白质沉淀凝固，2毫米以下的组织固定半小时至1小时即可。--可引起组织较强的收缩使之变硬，对核固定不佳。--对某些酶的固定很好，如碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等。--一般多与氯化汞、甲醛混合液使用，先用低浓度丙酮再经高浓度丙酮固定以减少组织收缩和过度硬化。;--强氧化剂，不能与酒精等还原剂混合，常配成0.5%水溶液固定组织。--单独固定组织不能沉淀蛋白质，但加入冰醋酸转变为铬酸，（即酸化重铬酸钾），可使蛋白质凝固沉淀。--与甲醛混合是固定线粒体、高尔基复合体和嗜铬细胞等优良固定剂，若配成Eenker氏液，能很好的固定细胞质、胞核及染色体。--穿透速度快，组织收缩小，固定的组织必须流水充分洗涤（6—12h），否则影响染色。对酸性染料染色良好，对碱性料染较差，若加入升汞及醋酸等，则对细胞核染色极佳。;乙醇-甲醛液（AF液）配制：95%或无水乙醇90ml加入40%瓶装甲醛10ml，常用固定液。 兼有脱水作用，用于固定肥大细胞和糖元较好，米粒大小固定4—6h，大块组织12—24h，固定后不经水洗，直接放入95%酒精开始脱水。;Ｚenker氏液配制:重铬酸钾2.5g+升汞5g+蒸馏水100ml，加温溶解，冷却过滤，贮于棕色瓶内，成为贮存液。用时取此液95ml再加入冰醋酸5ml即成。 Ｚenker氏液固定后，细胞核和细胞浆染色较为清晰，特别显示骨骼肌的横纹 固定时间12-24h，然后冲洗24h，切片脱腊后需脱汞（浸入5%碘酒精10’），脱碘（5%硫代硫酸钠）→流水洗。;Bouin氏液配制：苦味酸饱和液75ml+甲醛25ml+冰醋酸5ml