【2017年整理】实验硫酸铵分级沉淀分离苯丙氨酸解氨酶.pptVIP

下载本文档

12
0
约小于1千字
约 16页
2017-06-10 发布于浙江
举报
版权申诉

【2017年整理】实验硫酸铵分级沉淀分离苯丙氨酸解氨酶.ppt

1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击这里二次下载。
3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次，网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档

【2017年整理】实验硫酸铵分级沉淀分离苯丙氨酸解氨酶

实验（一）硫酸铵分级沉淀分离苯丙氨酸解氨酶（8学时）;一、实验背景;二、实验原理;分级沉淀：不同盐浓度下各种蛋白质的溶解度是不同的，因此调节溶液的盐浓度可使各种蛋白质先后沉淀出来，或者使需要的酶与其它杂质蛋白分开，达到提纯目的，这就是分级沉淀法。硫酸铵沉淀一般在蛋白纯化的步骤中前期用，它简便且重复性好，但纯化倍数不高。分级沉淀中需加的固体硫酸铵或饱和硫酸铵溶液的量，可从硫酸铵饱和度量表中查得。;;苯丙氨酸解氨酶（L-phenylalanine:ammonia lyase，简称PAL）是植物体内苯丙烷类代谢的关键酶，与一些重要的次生物质如木质素、异黄酮类植保素、黄酮类色素等合成密切有关，在植物的正常生长发育和抵御病菌侵害的过程中起重要作用。 PAL催化L-苯丙氨酸裂解为反式肉桂酸和氨，产物反式肉桂酸在波长290nm处有最大吸收值。在反应系统中如果酶???加入量适当，反式肉桂酸的生成速率即A290升高的速率可在几小时内保持不变，因此，可通过测定A290 升高的速率来测定PAL的活力。规定1小时内A290增加0.01为PAL的一个活力单位。 ;三、实验试剂;四、实验步骤;实验步骤;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;（2）将酶液到入烧杯内，烧杯置于冰浴中，然后在边缓慢搅拌下缓慢加入称好的固体硫酸铵（不能有大颗粒，放在研钵中研碎），待全部硫酸铵加入后，再缓慢搅拌20min；;实验步骤;实验步骤;实验步骤;1、PAL总活力计算：分别算出每ml酶粗提液和沉淀液[1]和[2]中PAL的总活力； 2、算出40~75%硫酸铵沉淀中PAL的回收率： ;下面开始实验！