同种异体骨移植修复过程中转化生长因子β1表达的实验研究_培训课件.pptVIP

现已证实，TGF-β1可诱导间充质细胞向成软骨细胞、成骨细胞转化， 以软骨内成骨或膜内成骨的方式成骨。 本研究观察到，异体骨移植成骨过程主要是以膜内成骨方式进行，软骨内成骨很少。 原位杂交结果显示，在膜内成骨阶段TGF-β1mRNA表达量最高，随即呈现出下降趋势。 这可能是骨移植时局部出血较少，有氧环境利于间充质细胞向成骨细胞转化，以膜内成骨的方式形成骨组织。这与骨折愈合过程中， 局部TGF-β1mRNA的表达特征明显不同，即没有与软骨内成骨阶段有关的第二次峰值出现。 二、免疫排斥反应抑制TGF-β1的表达 本研究表明，主要组织相容性抗原不配的同种异体骨移植的成骨效果明显不如组织抗原相配者。原位杂交结果也显示出同样的抑制特征。这说明供受体间主要组织相容性抗原不配抑制骨移植的修复过程以及局部内源性TGF-β1的表达。这一结论与以往研究结果是一致的。 研究证明，骨细胞膜及细胞外骨基质中含有大量I、II类抗原分子。异体骨移植可以呈递抗原，诱发宿主产生以局部细胞免疫反应为主的排斥反应，导致移植骨周围炎性细胞浸润，毛细血管狭窄、闭塞，移植骨修复过程延迟或移植骨被超前吸收。 同时，免疫排斥反应过程中还产生了许多细胞因子，如IL-1，TNF-α等，它们除参与免疫调节外，还可激活破骨细胞的活性促进破骨并抑制成骨。体外研究发现，IL-1，TNF-α可以促进FAS介导的人类成骨细胞凋亡，抑制TGF-β1的表达。 尽管同种异体骨植入体内后，处于一个低水平的免疫反应状态，不存在异体器官移植所出现的超急性排斥反应，但仍会给骨修复、塑型、重建带来不利影响，反映在分子水平上表现为 TGF-β1 表达水平的降低或延迟。 三、移植骨冷冻处理对TGF-β1表达的影响 现已证实，异体骨经低温冷冻处理后可以降低其免疫原性，但同时其生物学活性也被减弱。这一现象的发生可能是移植骨内存活细胞死亡造成的。因为低温冷冻处理对移植骨而言，不仅仅是一个低温储藏的过程，植入前移植骨往往需要解冻，冻融的变化过程在改变抗原结构的同时，也会引起骨内存活细胞膜结构的破坏导致骨内细胞死亡。 本研究结果显示，低温冷冻处理对主要组织相容性抗原相配与不配的异体骨移植会造成两种截然不同的结局：对组织抗原相配者而言，表现为骨掺入延迟，TGF-β1mRNA表达水平降低；而对于组织抗原不配者，则表现为骨掺入加快，TGF-β1mRNA表达水平增高，并且在术后第2周达到高峰。这也说明了低温冷冻造成骨内存活细胞死亡以及细胞膜破坏，使与膜结构有关的抗原结构改变，移植物免疫原性下降。 以往研究表明，移植骨的生物学作用主要体现在以下三个方面：一是提供移植骨本身内在的生物学活性物质，即骨内存活细胞及其产物；二是骨基质内活性生长因子诱导宿主来源的未分化间充质细胞成骨，即骨诱导作用；三是充当宿主新生骨组织长入的支架，即骨传导作用。 本研究观察到，在冷冻异体骨移植物的周围及靠近边缘的部位有新生骨组织形成，同时局部也有TGF-β1mRNA及蛋白质存在。 证明了冷冻异体骨移植，后两种成骨途径是可能的。但是这种源于骨吸收后细胞外基质内细胞因子的成骨将是十分缓慢的，并且新生骨组织总是出现在移植骨表浅的部位，不会与移植骨很好地整合在一起。 Enneking等也发现冷冻骨内部“爬行替代”主要发生在移植骨浅表面及两端，移植后5年，移植骨仅有20%被新骨替代，深层未修复部分仍保持原结构。 四、多种因素交互作用影响TGF-β1的表达 同种异体骨移植修复过程中，时间、移植骨处理以及主要组织相容性抗原是否相配等因素相互作用影响移植骨局部内源性TGF-β1mRNA的表达。本研究证实，主要组织相容性抗原相配的新鲜异体骨移植，在术后1周TGF-β1 mRNA表达强度最高，并且新生骨组织出现最早，成骨效果最好。 本研究发现，主要组织相容性抗原相配的异体骨在冷冻以后，移植骨局部TGF-β1 mRNA表达降低，而组织抗原不配者则相反。说明主要组织相容性抗原是否相配与移植骨冷冻处理交互作用影响 TGF-β1mRNA的表达。此外，对于新鲜异体骨而言，主要组织相容抗原差异是影响TGF-β1 mRNA表达的关键因素，对于冷冻异体骨而言，主要组织相容性抗原差异的影响就显得不甚重要了。 五、结语 1．同种异体骨移植的修复过程是一个复杂的生物学行为，单一生长因子并不能解释其全部内容。关于其它因子的表达以及局部应用生长因子促进骨修复等问题还有待于进一步研究。 2．本研究采用免疫组化染色和原位杂交技术检测移植骨修复过程中修复细胞内及细胞外TGF-β1的表达及分布情况，