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微生物工程复习资料 绪论 微生物工程：利用微生物的特定性状和功能，通过现代化工程技术生产有用物质或把微生物直接作为生物反应器的技术体系；是将传统发酵与现代DNA重组、细胞融合、分子修饰和改造等新技术结合并发展起来的现代发酵技术。 微生物工程的特点： 优点（与化学工程相比）：1、生产过程通常在常温常压下进行，操作条件温和，不需考虑防爆问题。2、原料以碳水化合物为主，不含有毒物质，没有精制的必要。3、生产过程是以生命体的自动调节方式进行的，因此多个反应就象一个反应一样，可在单一设备（发酵罐）中进行。4、能容易地生产复杂的高分子化合物，如酶、光学活性体等。5、能高度选择性地进行复杂化合物在特定部位反应，如氧化、还原、官能团导入等。6、生产产品的生物体本身也是发酵产物，富含维生素、蛋白质、酶等有用物质；除特殊情况外，培养液一般不会对人和动物造成危害。7、通过微生物菌种改良，能够利用原有设备使生产飞跃上升。例如青霉素的生产。 面临的挑战：1、化学合成工业的竞争；2、农业生物工程的冲击。 发酵工业对微生物菌种的要求：1、能在廉价原料制成的培养基上迅速生长，并形成所需的代谢产物，产量高。2、可以在易于控制的培养条件下迅速生长和发酵，且所需酶活力高。3、根据代谢控制的要求，选择单产高的营养缺陷型突变株或调节突变株或野生菌株。4、选育抗噬菌体能力强的菌株，使其不易感染噬菌体。5、菌种纯粹，不易变异退化，以保证发酵生产和产品质量的稳定性。6、菌种不是病原菌，不产生有害的生物活性物质和毒素，以保证安全。 发酵工程发展过程中几个标志性人物和事件： 1）1680列文胡克 显微镜 2）1857 巴斯德证明了酒精是由活的酵母发酵引起 3）1897 毕希纳发现磨碎的酵母仍使糖发酵形成酒精──酶 4）1905 科赫 固体培养基的发明，奠定了纯培养技术。 5）1928 弗莱明发现青霉素 6）1953 Watson 和Crick 双螺旋结构 发酵工程研究内容（5点）： 微生物菌株选育——微生物菌株选育、改造与功能优化技术； 发酵工艺——发酵过程优化、控制与反应器技术； 单元操作——发酵工程过程工程技术； 发酵产品分离提取工艺——发酵产品高效提取技术与装备； 废物处理——绿色制造工艺的开发。 6、一般菌种分离纯化和筛选步骤：标本制备→标本材料的预处理→富集培养→菌种初筛→菌种复筛→性能鉴定→菌种包藏 工业微生物菌种的选育及扩大培养 原生质体融合概念：就是把两个亲本的细胞分别去掉细胞壁，获得原生质体，将两亲本的原生质体在高渗条件下混合，由聚乙二醇（PEG）作为助融剂，使它们互相凝集，发生细胞质融合，接着两亲本基因组由接触到交换，从而实现遗传重组。 原生质体育种技术主要有哪些：融合、转化技术、诱变技术 原生质体融合的方法和特点。 方法：1）硝酸钠法；2）高钙离子法；3）PEG法；4）多聚化合物法。 特点：1）大幅度提高亲本之间重组频率；2）扩大重组的亲本范围；3）原生质体融合时亲本整套染色体参与交换，遗传物质转移和重组性状较多，集中双亲优良性状机会更大；4）可以和其它育种方法相结合，把由其他方法得到的优良性状通过原生质体融合再组合到一个单株中；5）用微生物的原生质体进行诱变，可明显提高诱变频率。 原生质体融合的基本工程（步骤）： 原生质体形成率和再审率（计算方法）： 1）将用酶处理前的菌体经无菌水(或高渗溶液)系列稀释，涂布在完全培养基平板上培养，计出原菌数，该数值为A。 2）将用酶处理后得到的原生质体分别经如下两个过程处理： = 1 \* GB3 ①用无菌水适当稀释，在完全培养基上培养计数。由于原生质体在低渗透压下会破裂失活，所以长出的菌落数为未形成原生质体的原菌数，该数值为B。 = 2 \* GB3 ②用高渗透压液适当稀释，在再生培养基平板上培养计数，生长出的菌落数为原生质体再生的菌数和未形成原生质体的原菌数之和，该数值为C。 原生质体形成率= 原生质体再生率= 菌种保藏原理及保藏方法： 原理：主要是根据菌种的生理生化特点，人工创造条件，使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通过保持培养基营养成分在最低水平、缺氧状态、干燥和低温，使菌种处于“休眠”状态，抑制其繁殖能力。 保藏方法：1）斜面冰箱保藏法；2）沙土管保藏法；3）菌丝速冻法；4）石蜡油封存法； 5）真空冷冻干燥保藏法；6）液氮超低温保藏法。 种子扩陪的概念，目的以及标准： 种子扩大培养：指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 目的：（1）接种量的需要，抑制侵染；（2）缩短发酵周期；（3）逐级适应。 标准：（1）生长活力强、同步性较好；（2）生理状态稳定，生