辅以多粘类芽孢杆菌堆肥提取液工艺及其对土壤微生物群落结构影响.docVIP

辅以多粘类芽孢杆菌堆肥提取液工艺及其对土壤微生物群落结构影响 　　摘要：以猪粪堆肥为原料，建立多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）与猪粪堆肥提取液的配伍技术工艺，并研究其对烟草黑胫病（Phytophthora parasitica）土壤微生物群落结构的影响。结果表明，最佳技术工艺是多粘类芽孢杆菌添加到猪粪堆肥中发酵72 h，再按照水∶堆肥8∶1（质量比）浸提48 h。不同工艺提取的猪粪堆肥提取液均能有效抑制烟草黑胫病病原菌的生长。与对照相比，施用辅以多粘类芽孢杆菌的堆肥提取液处理土壤疫霉ITS基因拷贝数减少了18.15%～53.33%，土壤中芽孢杆菌数量增加了45.63%～255.00%，同时增加了土壤细菌和放线菌数量，但是减少了真菌数量。辅以多粘类芽孢杆菌的猪粪堆肥提取液处理增加了Bacillus niabensis和B. aryabhttai的丰富度和细菌遗传多样性，但降低了真菌的丰富度和遗传多样性 关键词：多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）；堆肥提取液；浸提工艺；遗传多样性 中图分类号：Q938.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2017）04-0634-06 堆肥提取液是一个丰富的微生物资源库，含有大量的各种微生物，具有潜在的促生及生防作用[1]。堆肥提取液的生防效果与堆肥提取液中微生物的数量有关[2-4]。在堆肥提取液中添加拮抗微生物能够增强作物抗性，以水稻秸秆为原料的堆肥提取液经木霉（Trichoderma harzianum）加强后可使得黄秋葵湿腐病（Choanephora cucurbitarum）的发生率减少85%[5]。在土壤中浇灌好气提取堆肥提取液和添加拮抗菌的好气提取堆肥提取液，可使马铃薯茎溃疡病（Rhizoctonia solani Kühn）和疮痂病减少到18%～33%[6]。堆肥提取液过滤除菌或加热灭菌后仍还有抑菌作用[7]，说明堆肥提取液的生防效果与微生物产生的抗生物质有关。在堆肥提取液中辅以兼具促生及生防的根际有益微生物将成为未来堆肥提取液生防研究的热点内容之一[8]。但是如何将有益微生物与堆肥提取液进行配伍，以最大程度发挥有益微生物和堆肥提取液的生防促生效果，还有待于进一步的研究 近年来，越来越多的学者提出从根际微生态角度综合研究解决土传病害的新思路[9]，并认为根际微生态失调可能是土传病害发生的主要原因[10]。由于烟草根际微生态是烟草-土壤-微生物及其环境相互作用的特殊系统，因此，协调三者关系应该是解决烟草黑胫病连作障碍的关键问题。芽孢杆菌被认为是土壤微生物中最具活力的部分之一，也是土壤细菌中的优势种群，在土壤的物质和能量循环中发挥重要作用，尤其是作为生物菌剂在生物防控和促进植物生长方面有着重要的应用价值[11]。随着对土传病害发生土壤核心或关键微生物种群研究的深入，发现芽孢杆菌在降低土传真菌病害发生和调控病害发生的根际土壤微生物区系方面发挥着重要作用[9]。因此，在烟草黑胫病的生物防控上，应坚持减少土壤中黑胫病病原菌的数量和调控烟草黑胫病病害发生的根际土壤微生态群落结构多样性并重的原则 多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）属于芽孢杆菌属，有关其强化的堆肥提取液对植烟土壤微生物群落结构的影响等方面的研究尚不多见。因此，本研究以腐熟的猪粪堆肥为原料，建立多粘芽孢杆菌与猪粪堆肥提取液的配伍技术工艺，并研究其对烟草黑胫病土壤微生物群落结构的影响，以期为堆肥提取液的推广应用提供理论依据 1 材料与方法 1.1 材料 猪粪堆肥由鄂州市广丰有机肥有限公司提供，有机质39.55%，全氮2.59%，全磷7.94%和全钾1.37%。芽孢杆菌为湖北省农业科学院植保土肥研究所实验室筛选的多粘类芽孢杆菌ZWYY-5。烤烟品种为云烟87。供试土壤为连续种植烟草且黑胫病严重发生，土壤基本理化性质为pH 6.65，有机质17.50 g/kg，碱解氮108.30 g/kg，速效磷33.88 g/kg，速效钾149.76 g/kg 1.2 试验设计 1.2.1 辅以多粘芽孢杆菌的堆肥提取液工艺 工艺1：选用NB培养基，培养多粘类芽孢杆菌48 h后计数，离心浓缩至数量达到108～109 CFU/mL，定容到200 mL。将200 mL菌液加到1 kg堆肥中，并调节水分含量，分别发酵24、36、48、72、96 h，于4 ℃保存。将25 g发酵好的上述堆肥（?l酵不同天数）加入到500 mL容量瓶中，再加入200 mL自来水，即水∶堆肥8∶1（质量比），浸提48 h，浸提完成后分别经双层纱布过滤，于4 ℃保存 工艺2：将25 g堆肥加入到500 mL容量瓶中，再加入200 mL