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过山蕨组培快繁技术探究 　　摘要 利用组织培养技术研究过山蕨种苗快繁技术体系，包括孢子囊的消毒方法、孢子萌发培养基、配子体增殖培养基以及幼孢子体诱导基质，结果表明：较好的孢子囊消毒方法是70%酒精+5%次氯酸钠组合，适合过山蕨孢子萌发和配子体生长发育的培养基是MS+2%蔗糖+0.7%琼脂，pH值6.0；适合配子体增殖的培养基为MS+2%蔗糖+0.7%琼脂+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，pH值6.0；适合幼孢子体诱导的基质配比是草炭+细河沙（1∶1） 关键词 过山蕨；组培；快繁 中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）22-0061-02 Absrtact Using tissue culture technology to research rapid propagation technology of Camptosorus sibiricus Rupr，including the spore sac disinfection methods，spore germination medium and young sporophyte inducing matrix.The results showed that better spore sac disinfection method is 70% alcohol+0.5% NaClO combination，Suitable medium for spores germination and gametophyte growth is MS+2% sucrose+0.7% agar，pH 6.0；Suitable medium for gametophyte proliferation is MS+2% sucrose+0.7% agar+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA，pH 6.0；Suitable matrix ratio for young sporophyte induced is peat + small particles river sand （1∶1）. Key words Camptosorus sibiricus Rupr；tissue cultu血小板聚集、抗艾滋病等作用[1-2]。市场所售过山蕨多为野生，因其生长缓慢，野外繁殖率低，过度采挖造成过山蕨野生资源急剧下降，2005年被收载入《河南省重点保护植物名录》。目前，过山蕨繁殖普遍采用分株法，繁殖速度较慢，远不能满足日益增长的市场需求。因此，利用组培技术进行过山蕨种苗的快速繁殖技术研究，是保护和利用过山蕨的必要途径。本试验筛选出过山蕨孢子萌发培养基、配子体增殖培养基及幼孢子体诱导最佳基质配比，从而建立过山蕨种苗的快速繁殖技术体系，以便稳定、高效生产过山蕨种苗，缓解野生资源压力，满足市场需求 1 材料与方法 1.1 试验材料 采集河南省南阳市西峡县太平镇山区野生过山蕨植株，由河南农业大学中药材工程技术研究中心高致明教授鉴定为铁角蕨科过山蕨（Camptosorus sibiricus Rupr），种植于南阳理工学院张仲景药用植物园，待孢子成熟以后，采集孢子囊放入冰箱冷藏备用 1.2 试验方法 1.2.1 孢子囊的消毒。将过山蕨孢子囊用滤纸包好，消毒方法：①70%酒精。消毒15～25 s，无菌水漂洗4～5次；②5%次氯酸钠。消毒5 min，无菌水漂洗4～5次；③0.1%升汞。消毒5～8 min，无菌水漂洗4～5次；④70%酒精+5%次氯酸钠。先用70%酒精消毒15～25 s，再用5%次氯酸钠消毒5 min，无菌水漂洗4～5次；⑤70%酒精+0.1%升汞。先用70%酒精消毒15～25 s，再用0.1%升汞消毒5～8 min，无菌水漂洗4～5次；⑥5%次氯酸钠+0.1%升汞。先用5%次氯酸钠消毒5 min，无菌水漂洗4～5次，再用0.1%升汞消毒5～8 min，无菌水漂洗4～5次。消毒后的孢子囊无菌条件下接种至MS培养基上，每个处理接种10瓶，每瓶接种3～5个孢子囊，3次重复。30 d后，观察孢子萌发率和污染率，筛选最佳消毒方法 1.2.2 孢子萌发。将过山蕨孢子囊用滤纸包好，先用70%酒精消毒15～25 s，再用5%次氯酸钠消毒5 min，无菌水漂洗4～5次，将消毒后的孢子囊无菌条件下接种至不同无机盐含量（MS、1/2MS、1/4MS和1/8MS，蔗糖浓度2%，琼脂0.7%，pH值6.0）和不同蔗糖浓度（MS，琼脂0.7%，蔗糖浓度1%、2%、3%、4%，pH值6.0）的培养基上，每种培养基接种10瓶，每瓶接种3～5个孢子囊，3次重复。观察孢子萌发时间、萌发率，60 d后观