P物质对哮喘患者嗜酸粒细胞的活化和趋化作用论文.docVIP

　　P物质对哮喘患者嗜酸粒细胞的活化和趋化作用论文 .freelol L-1 ，最大趋化浓度为1×10-10 mol L-1 ，此后随浓度的增加，其趋化作用降低.PAF对Eos的趋化作用因SP预处理Eos而显著强化（P 0.01），NK1受体拮抗剂GR71251对SP的预处理作用有显著的阻断效应. 结论 SP作用于Eos胞膜上的NK1受体，经百日咳杆菌毒素（PTX）敏感型G蛋白，活化磷酯酶C从而激活Eos.同时SP还是一种Eos的趋化介质，与PAF有协同作用，NK1受体介导了这一协同效应. Keya Abstract:AIM To investigate the effect of substance P（SP）on the activation of eosinophils（Eos）.METHODS Eos peripheral blood of asthmatic sub-jects using a discontinuous Percoll density gradients.The ef-fect of SP on the activation of Eos easur-ing the activity of eosinophil peroxidase（EPO）in Eos and de-granulation of Eos.Effect of SP on the survival of Eos otaxis by SP and platelet-activating factor（PAF）odified Boyden’s chamber technique.Induced chemotaxis of pre-treated Eos ulate the degranulation of Eos significantly.In the present study，onstrated a synergistic effect of SP on the activation of Eos by platelet activating factor（PAF）.But the role of SP could be attenuated markedly by antagonist for NK1receptor，GR71251，inhibitor of phospholipase C（PLC），and neomycine.Houlated Eos migration in vitro ol L-1 ，and maxi-mal effect ol L-1 .The effect of SP otactic response to PAF（10-7 mol L-1 ）ol L-1 ）.Potentiating effect of SP on PAF-induced Eos chemotaxis ay be cou-pled the specific receptor（NK-1）on Eos，and activate PLC and then induce the degranulation of Eos.In addition，SP is also a chemotactic mediator of human Eos and synergistic ycine）、血小板活化因子（PAF）均为Sigma公司产品，Percoll系瑞典pharmacia产品，酶联分光光度计系第四军医大学寄生虫学教研室研制，微孔滤膜为上海新亚净化器材厂生产. 1.2 方法 1.2.1 人Eos的分离和纯化 取哮喘患者静脉血30mL，按文献［1］分离Eos. 1.2.2 SP对Eos过氧化物酶（EPO）活性和脱颗粒的调节作用 1.2.2.1 SP对Eos EPO活性的影响 取1×109 L-1 Eos悬液45μL加入55孔反应板中.在不同浓度SP处理组，每孔加入5μL不同浓度的SP，使其终浓度分别为1×10-10 ～1×10-6 mol L-1 .对照组每孔加入生理盐水5μL.置37℃孵育2h.按文献［2］报道的方法测定EPO活性，用酶联分光光度计，测A492nm 值，以A492nm 值表示活性.在GR71251处理组中于加入SP前，以GR71251（终浓度为1×10-7 mol L-1 ），孵育15min.20℃5000r min-1 离心5min，弃上清，以Hank’s液洗涤管底细胞2次，重悬于45μL的Hank’s液中，以后步骤同上述.每一组测6孔. 1.2.2.2 SP对脱颗粒的影响 参照文献［3］进行.Eppendorf管中加入1×109 L-1 Eos悬液180μL和SP20μL（终浓度