RANTES、MIP-1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动的机制研究.docVIP

　　RANTES、MIP?1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动的机制研究 王晓颖 樊嘉 周俭 邱双健 吴晓峰 刘银坤 汤钊猷 【摘要】 目的 探讨RANTES、MIP?1α趋化因子促人肝癌细胞侵袭运动的机制。方法 使用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察RANTES、MIP?1α刺激后人肝癌细胞聚合型肌动蛋白(F?actin)聚合的变化。采用明胶酶谱法分析RANTES、MIP?1α对人肝癌细胞基质金属蛋白酶分泌及活性的影响。结果 RANTES、MIP?1α可诱导人肝癌细胞内F?actin的聚合，并刺激细胞突起和伪足形成。明胶酶谱显示RANTES、MIP?1α刺激后人肝癌细胞基质金属蛋白酶MMP?2、MMP?9等活性显著增加，降解基质能力增强。结论 RANTES、MIP?1α趋化因子可以诱导F?actin聚合促进人肝癌细胞定向运动，并通过增加基质金属蛋白酶活性提高人肝癌细胞侵袭能力。 【关键词】 肝肿瘤； 趋化因子； 细胞运动； 肿瘤浸润 Mechanism of RANTES and MIP?1α promoting invasion and migration of hepatoma carcinoma cells 【Abstract】 Objective To investigate mechanism of chemokines including RANTES and MIP?1α promoting invasion and migration of hepatoma carcinoma cells (HCC). Methods The polymerization of HCC F?actin stimulated by RANTES and MIP?1α etry and confocal microscope. Gelatin zymography assay atrix metalloproteinase of HCC.Results Both RANTES and MIP?1α could prominently promote polymerization of F?actin and formation of cell process and pseudopodia of HCC. Gelatin zymography assays shoulation ote migration of HCC by inducing polymerization of F?actin and increase invasive potential of HCC by enhancing activity of MMPs. 【Key a carcinoma; Chemokines; Cell migration; Tumor invasion 趋化因子(chemokines)是一类分泌型小分子蛋白质。近来发现其与肿瘤侵袭转移密切相关［1-2］。我们前期研究发现肝癌细胞表达CCR1趋化因子受体，其配体RANTES、MIP?1α等趋化因子可以促进肝癌细胞侵袭运动［3］。为进一步阐明RANTES、MIP?1α等趋化因子促进肝癌细胞侵袭运动的机制，本研究深入观察RANTES、MIP?1α刺激后人肝癌细胞聚合型肌动蛋白(F?actin)及基质金属蛋白酶变化情况。 1 材料与方法 1.1 细胞培养 高转移人肝癌细胞株MHCC97H由本所建立。采用DMEM培养液，37 ℃、5%CO2饱和湿度的条件下培养。 1.2 悬浮细胞肌动蛋白聚合试验 将处于对数生长期的MHCC97H人肝癌细胞常规消化脱壁， 重悬于PBS， 浓度为1×106个细胞/ml。取上述细胞悬液分别加入含100 ng/ml的RANTES或MIP?1α(RD公司)无血清DMEM培养液，不加趋化因子为空白对照。分别于趋化因子刺激后15、30、60、120、300和600 s时，加入固定染色液［含0.1 mg/ml LPC，磷酸缓冲液配制的10%福尔马林，1.65×10-6 mol/L的FITC?Phalloidin(Molecular Probes公司)］并染色10 min。染色后的细胞1 500 r/min离心5 min，用1 ml PBS液重悬细胞，上流式细胞仪分析。每次分析1×105个细胞。最大激发波长为560 nm，吸收波长为540 nm。以空白对照组的荧光总量为100%计算趋化因子刺激各时间点荧光总量的相对比值。 1.3 贴壁细胞的肌动蛋白聚合试验 将处于对数生长期的MHCC97H人肝癌细胞常规消化脱壁，用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液重悬细胞，制备浓度为1×104个细胞/ml。将上述细胞悬液加入预置细胞培养载玻片的6孔培养板的各室中，培养