RECK在人喉鳞癌组织中的表达及临床意义.docVIP

　　RECK在人喉鳞癌组织中的表达及临床意义 【摘要】 目的 通过检测80例人喉鳞癌组织中RECK的表达情况，讨探RECK在喉鳞癌发生发展中的作用。方法 用免疫组化法、蛋白印迹分析(edical University3.Department of Head and Neck Surgery, Liaoning Cancer Hospital, Shenyang 110000 China)Abstract: Objective To discuss the potential role of RECK in Laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC) by testing the expression of RECK in human LSCC, a total of 80 LSCC patients. Methods (1) RECK expression in surgically resected tissue samples of laryngeal carcinomas (n=80) ined immunohistochemically;(2) The expressions of RECK erase chain reactions (RT-PCR). Results The positive RECK stained in the horny pearl and glandular tube cells, but not in the carcinomal cells. Conclusions RECK gene can?t be considered as a key point in the pathogenesis of LSCC. 　　Key ous cell carcinoma (LSCC); RECK gene 　　喉癌是头颈部第二位原发于上皮的最常见的恶性肿瘤，发病率仅次于鼻咽癌。在过去40年里对喉癌的发病机理的研究已取得许多进步，但喉癌发生的确切机理、侵袭和转移的分子机制还不十分清楚。RECK ( reversion-inducing-cysteine-rich protein otifs) 基因是近年来发现的新型基质金属蛋白酶抑制剂[1]，目前研究认为作为一种独立的膜锚合基质金属蛋白酶调节因子，RECK 基因在多种正常组织中均高表达，而在肿瘤组织中表达量明显下降甚至不表达，且 RECK 基因表达下降的幅度与肿瘤侵袭转移能力成明显正相关。因此，RECK 基因是目前研究较为广泛的一种抑癌基因。 　　1 材料与方法 　　1.1 临床资料 　　喉癌组织80例,来源于2005年5月至2007年10月辽宁省肿瘤医院行喉癌手术的切除标本,患者年龄42～81岁,平均60.5 岁,均保存有完整的临床和病理资料: I期24 例，II期12 例，III期22 例，IV期17 例。每1例石蜡切片皆包括癌组织和其癌旁的正常黏膜组织。 　　1.2 免疫组化染色 　　山羊抗人多克隆抗体RECK (1∶50倍稀释)购自Santa Cruz Biotech，免疫组化SP 试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。所有组织均经甲醛固定，常规石蜡包埋，免疫组化SP 法染色参照试剂说明书进行，RECK采用高温高压法修复抗原。用已知的阳性切片作阳性对照，PBS 代替一抗作阴性对照。 (责任编辑：编辑04) 　　1.3 argin-top: 0px; margin-right: 0px; margin-bottom: 10px; margin-left: 0px; padding-top: 0px; padding-right: 0px; padding-bottom: 0px; padding-left: 0px; line-height: 24px; color: rgb(0, 0, 0); 　　应用RIPA 裂解液裂解组织,应用分光光度计测定总蛋白浓度SDS凝胶电泳(90 V,2 h),电转仪电转,(300 mA,1.5 h,4 ℃)。将硝酸纤维素膜与适当稀释的第一抗体(1∶200)室温下反应2 h, 再与用杂交液按比例(1：8 000)稀释的二抗杂交2 h, ECL反应显色。 　　1.4 RT-PCR法检测组织中RECK基因的mRNA表达 　　Trizol 一步法抽提组织中的总RNA,引物设计见 　　在本研究中按照不同解剖分区、病理分化程度、有无淋巴结转移将80 例喉癌手术标本分类进行研究。通过免疫组化染色发现RECK蛋白表达仅存在于粘膜固有层中的混合腺体的腺上皮细胞和少数高分化鳞癌的角化珠及其周围细胞中，而在中分化癌巢及大部分癌巢的非角化细胞中及正常喉组织中未发现RECK蛋白阳性表达。在不同解剖分