VEGF基因特异性siRNA转染后对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响论文.docVIP

　　VEGF基因特异性siRNA转染后对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响论文 .freelan breast cancer cells Abstract AIM: To explore the effect of RNA interferencemediated vascular endothelial groan breast cancer MCF7 cells. METHODS: Small interfering RNA (siRNA) targeting VEGF gene plate ine, the proliferation of MCF7 cells etry, and the apoptosis easured by Hoechst33258 staining. The change of cell cycle etry (FCM). The expression of VEGF on mRNA and protein level munohistochemical technology respectively. RESULTS: The siRNA targeting human VEGF gene effectively inhibited the proliferation of MCF7 cells, induced cell apoptosis, arrested the cell cycle in G0/G1 phase, and decreased the expression of VEGF on both mRNA and protein level. But these effects did not appear in scrambled siRNA (siRNASCR) control group. CONCLUSION: The siRNA targeting human VEGF gene could reduce VEGF expression,.freelRNA表达的变化, 免疫细胞化学法检测VEGF蛋白的表达。结果: 所设计的两个靶位点siRNA, 均能有效地抑制MCF7细胞的增殖, 诱导细胞凋亡, 使细胞周期阻滞于G0/G1期,VEGF mRNA及其蛋白的表达明显减少; 而作为阴性对照的错义序列组siRNASCR则没有上述效应。结论: 体外转录合成的siRNA可抑制MCF7细胞中VEGF基因的表达, 抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。 关键词RNA干扰; 小干扰RNA; MCF7细胞; 血管内皮生长因子; 基因治疗 将外源性或内源性双链RNA (dsRNA)导入细胞后, 可引起与该段RNA同源的mRNA产生特异性降解, 其相应的基因也受到抑制, 这种发生在转录后的基因静寂(post transcriptional gene silencing, PTGS)现象1, 2被称之为RNA干扰(RNA interference, RNAi)。各种体内外实验证实, 21～23个碱基的短双链RNAsiRNA可在哺乳动物细胞组织内引起基因封闭作用, 并且比用核酶或反义RNA更有效、 更彻底。siRNA的干预效应具有高度的序列特异性, 任一碱基的错误均会导致RNAi效应的丧失3。20世纪70年代初, Folkman4首先提出“肿瘤生长和转移都依赖于新生血管的形成”的概念, 并得到大量实验结果的证实。目前发现, 能刺激细胞运动和肿瘤血管生成的因子有20多种, 其中血管内皮生长因子(vascular endothelial groineTM2000及TRIzol Reagent购自Invitrogen公司。T7 RiboMAXTM Express RNAi System试剂盒和反转录试剂盒购自Promega公司。四唑氮蓝（MTT）购自Sigma公司。Hoechst33258购自碧云天生物公司。SP法检测试剂盒购自北京中杉生物技术有限公司。 1.2 方法 1.2.1 siRNA的制备 从GenBank中获得已知的人VEGF mRNA的序列(序列号: AB021221), 用Promega公司提供的设计软件和试剂盒设计合成siRNA的序列。错义序列组SCR的序列跟第2组siRNA的序列有相同的GC组成, 但与人的mRNA没有明显的同源性, 以此作为阴性对照6。体外转录出siRNA, 并分别标记为siRNA1、 siRNA2和siRNASCR。3种siRNA的序列分别为: 5′GAUCAAACCUCACCAAGGCUU3′(正义链), 5′GCCUUGGUGAGGUUUGAUCUU3′(反义链); 5′GGAGUACCCUGAUGAGAUCUU3′(正义链), 5′GAUCUCAUCAGGGU