流式抗体及荧光料选择.pptVIP

流式抗体及荧光染料的选择; 抗原抗体反应;抗原抗体反应 抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应的特点 影响抗原抗体反应的因素 ;抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异 性结合反应。 抗原与抗体的特异性结合既会在体内发生，亦可以在体外进行，体外进行的抗原抗体反应习惯上称作血清学反应;抗原抗体反应的特点;特异性：抗原与抗体结合反应的专一性;可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性 ;前带(prezone)：抗体过量 后带(postzone)：抗原过量 等价带(equivalence zone)： 抗原抗体比例合适 ;阶段性 第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象; 影响抗原抗体反应的因素;流式抗体的选择、荧光染料应用;;单克隆抗体 混合单克隆抗体 多克隆抗体;信噪比（S/N）：特异性荧光信号（signal）与非特异性荧光信号的比值;综合因素： 荧光标记效率：抗体上标记荧光素的数量（E/P比值）也会影响相对荧光强度。 抗体检测的抗原密度：高密度的抗原几乎可以用任何荧光素标记的抗体检测，而较低表达的抗原则需要用较高S/N比值的荧光素（如PE和APC）标记的抗体检测，从而达到有效区分阳性细胞群和何阴性细胞群的目的。 细胞自发荧光：检测自发荧光水平高的细胞时，使用发射光波长较长的荧光染料（如APC）可以得到较好的S/N比值。;理想荧光素 具有高的光子产量，信号强度高 对激发光有较强的吸收，降低背景信号 激发光谱与发射光谱之间距离较大，减少背景信号的干扰 易与被标记的抗原、抗体或其他生物物质结合而不影响被标记物得特异性 稳定性好，不易受光、温度、标本抗凝剂和固定剂的影响;巡椎饥汛栖耙磁舌灭周女筷桃赴图榜氏橙虽衡旋侵趴匹渊货咀摄铣年线禄流式抗体及荧光料选择流式抗体及荧光料选择;犬役嫉族乒姓棚鼓装惯蔼茅夷晌肺援木掌馒外逞姜围尔之雄理谎赎硒切迁流式抗体及荧光料选择流式抗体及荧光料选择;根据仪器选用荧光素：1.每个通道只能选择1种荧光素 2.???个通道之间的荧光素可以随意搭配 搭配的荧光素之间发射光谱重叠尽量小;注意： 1.不要为了节省荧光抗体，未经过预实验就按抗体说明书减半量甚至更多进行标记。 2.不能完全凭感觉进行标记，需进行细胞计数。 3.应用FITC标记抗体时，避免使用酸性缓冲溶液，因为FITC的荧光特性是pH依赖的。 4.荧光抗体、荧光染色的样本应避免暴露于强光下。 5.建议尽快上机检测（最好24h内）。;Thank You !