α-黑素细胞刺激素在不同实验动物表皮中的表达及意义.docVIP

　　α?黑素细胞刺激素在不同实验动物表皮中的表达及意义 【摘要】 ［目的］初步研究α?黑素细胞刺激素（α?melanocyte?stimulating hormone，α?MSH）在不同实验动物表皮中的表达并阐明其意义，为色素障碍性皮肤病动物实验提供新的理论依据。［方法］对4组不同正常实验动物的表皮标本进行组织切片，应用免疫组织化学技术，观察α?MSH在4组不同实验动物表皮中的表达。［结果］α?MSH在白色昆明小鼠毛囊及白色FMN豚鼠表皮中呈阴性表达，在C57BL/6J小黑鼠毛囊黑素细胞及棕黄色HARTLY豚鼠表皮黑素细胞中呈阳性表达。［结论］白色昆明小鼠及白色FMN豚鼠适宜做色素增加动物实验研究，C57BL/6J小黑鼠及棕黄色HARTLY豚鼠适宜做色素减退动物实验研究；α?MSH可做为观测色素代谢障碍性疾病动物实验研究的一个重要指标。 【关键词】 α?黑素细胞刺激素；色素；表皮；动物实验 　　Abstract： ［Objective］To observe the expression of α?MSH in four different animals’scarfskin and to study its meaning for finding a novel evidence to research zoopery of pigment disease.［Methods］Scarfskins sheared from four different animal’s skin ade into specimens,and then treated munohistochemical staining.［Results］There elanocytes of the Kunming ouse and the scarfskin of the FMN elanocytes of the C57BL/6J black?mouse and the scarfskin of the HARTLY broals are suit for research of zoopery of increased?pigment disease,ent disease;and α?MSH is one of the most important indicators in the research of zoopery ent disease. 　　Key ent；scarfskin；zoopery 　　色素代谢障碍性皮肤病是皮肤科一类常见疾病，由于发病机理不详，故尚缺乏有效治疗手段。目前研究表明，表皮黑素细胞、角朊细胞可因多种因素刺激通过自分泌和旁分泌机制产生α?MSH，α?MSH通过与黑素细胞表面黑皮素－1受体结合而激活环磷酸腺酐/蛋白激酶A 途径，使黑素细胞黑素合成及分泌增加［1］。我们拟采用免疫组织化学技术，对α?MSH在4种常用于研究色素代谢障碍性皮肤疾病的动物［2］表皮中的表达进行观察，并判定其意义，以便为该病的动物实验研究提供新的理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 实验材料 　　1.1.1 实验动物 SPF级雌性昆明种小白鼠12只、C57BL/6J小黑鼠12只(由南方医科大学实验动物中心提供)，体重均为22g±3g，12周龄。雌性白色FMN豚鼠、雌雄各半的棕黄色HARTLY豚鼠各12只(由南方医科大学实验动物中心提供)，体重均为300g±20g。 　　1.1.2 实验试剂 Sheep Anti?α?MSH polyclonal antibody（CHEMICON）；Rabbit Anti?SheepIgG（H＋L）（SouthernBiotech）；DAB显色试剂盒（北京博奥森生物技术公司）；抗体稀释液（北京中山生物技术有限公司）；10%中性甲醛及多聚赖氨酸（北京赛驰生物科技有限公司）；PBS、柠檬酸盐缓冲液（武汉博士生物技术有限公司）。 　　1.1.3 实验仪器 RM2135型石蜡切片机(LEICA)；XSP?12C型OLYMPUS显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；HS恒温恒湿箱(无锡索南亚试验设备有限公司)；可调微量移液仪、湿盒、切片架(北京金辉盛业科技有限公司)。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 动物处理 小白鼠、小黑鼠各12只；雌雄各半的棕黄色豚鼠、雌性白色豚鼠各12只，各组动物预养3d，正常喂养1周后，于第8天上午将各组动物用3%戊巴比妥45mg/Kg腹腔麻醉后，作常规固定，刮除背部皮肤表面毛发，用组织剪剪取2cm×2cm大小皮肤数块，10%中性甲醛固定，常规石蜡切片备用。 　　1.2.2 免疫组织化学检测 链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(S-P)常规染色法：石蜡标本常规4um连续切片。石蜡切片脱蜡