11分子诊断与临床.ppt

主要内容 概述 分子诊断的常用技术 分子诊断在临床的应用 分子诊断在应用中的问题及对策 分子诊断的发展方向 分子诊断学 以分子生物学理论为基础 利用分子生物学的技术和方法 研究人体内源性或外源性的生物大分子（如DNA、RNA和蛋白）和大分子体系的存在、结构或表达调控的变化 为疾病的预防、预测、诊断、治疗和转归提供信息和决策依据 检验医学的分支学科之一 分子诊断学的研究对象 生物大分子 核酸：DNA、RNA 蛋白 大分子体系 基因 细胞 组织 分子诊断的策略 遵循实验诊断学的基本原则 不同疾病及病因采用不同方法 根据检测目的开展不同层次的检测 注重环境基因组学研究成果 发挥在耐药性方面的潜在作用 在疾病预测、健康检查、个体化治疗中的作用 关注分子诊断中的医学论理和生物安全问题 开发简便、快速、准确、特异、灵敏的方法 二、分子诊断的主要技术 低通量技术 DNA分析：Southern blot、PCR、RFLP、 ASO、SSCP、DGGE、DHPLC、DNA含量测定 染色体分析：FISH、CGH RNA分析：ISH、Northern blot、RT-PCR 蛋白质分析：IHC、Western blot 高通量技术 核酸测序技术—基因诊断的金标准 生物芯片(基因芯片)技术 蛋白质组学技术 2-DE 质谱技术：MALDI-TOF 组织芯片 蛋白质组信息学 二、几种常用的分子诊断技术 核酸扩增 分子克隆 核酸分子杂交 DNA测序 单核苷酸多态性分析技术 生物芯片技术 蛋白质组学技术 生物信息学 1、PCR 体外核酸扩增 生物技术领域最重要四项技术之一 细胞整合技术 分子克隆技术 蛋白工程技术 2、分子克隆 （基因克隆，基因重组） 基本步骤 分 切 接 转 筛 3、核酸分子杂交 定义 不同来源的、具有互补序列的两条核酸单链 在一定条件下通过碱基配对原则形成双链的过程 分子杂交技术的理论基础 DNA（RNA）的变性与复性 核酸分子杂交 基本类型 Southern杂交待测核酸是DNA片段 Northern杂交待测核酸是RNA片段 衍生类型：斑点杂交、原位杂交 等 4、DNA测序 已知序列的验证性测序策略 未知序列的从头测序策略 随机测序法 （鸟枪法、人工转座子法 ） 定向测序法 （引物测序法、互套缺失法 ） 全基因组测序策略 DNA测序常用技术 链末端终止法（ Sanger法） 化学降解法 测序新技术 MALDI-TOF MS 杂交测序法 焦磷酸测序技术 原子探针显微镜法 单分子测序技术 自动化测序常规应用 自动化测序 充分体现DNA序列自动化分析技术的简单、安全、精确、并行和高效等特点 目前，自动化测序已成为DNA序列分析的主流，几乎完全取代了手工测序 类型： 基于单一荧光染料标记的自动化测序系统 基于多种荧光染料标记的自动化测序系统 5、单核苷酸多态性分析技术 SNP：第三代遗传标志，是决定人类疾病易感性和药物反应差异性的主要因素 SNP检测技术基本步骤 靶序列的扩增 SNP特异位点的区分 方法：杂交、PCR、分子构象、酶法等 数据的检测分析 方法：凝胶电泳、荧光检测、基因芯片、 质谱分析 等 主要的SNP检测方法 凝胶电泳分析技术 SSCP、TTGE、TGGE、DGGE 分子杂交技术 ASO、DASH、PNA杂交、LNA 杂交 荧光共振能量转移 Taqman探针技术、分子信标技术、 蝎状探针技术、替代探针技术 6、生物芯片技术 技术的核心：杂交技术 实质：分子生物间特异性相互作用（互补配对） 步骤： 已知物质点样（阵列） 加标记的待测样品，杂交 检测 数据分析、处理 优点：高度并行性、多样化、自动化、微型化 缺点：只能检测已知的大分子 不能发现未知的大分子 应用 核酸分析（基因表达分析、基因突变检测、基因测序、基因图谱制作、多态性分析）、 药物研究、蛋白质组鉴定及微生物菌种鉴定 主要类型 基因（DNA）芯片 RNA芯片 蛋白质芯片 细胞芯片 组织芯片 芯片实验室 (Lab-on-a-chip ) 7、蛋白质组学 蛋白质组：一个细胞或一个组织或一个机体的基因所表达的全部蛋白质。 蛋白质组学：从整体的角度，分析细胞内动态变化的蛋白质组成成分、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，提示蛋白质功能与细胞生命活动规律的相互关系。 研究对象的整体性 研究目标的动态性 体现生命的复杂性 蛋白质组学 研究范畴： 蛋白质与蛋