动物细胞工程-细胞工程.pptVIP

第二篇 动物细胞工程 4.1 培养细胞的生物学特性 4.1.1 体外培养细胞的类型 是否贴壁？？ 1）贴壁型细胞:附着在某一固相支持物表面才  能生长的细胞。 2）悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而 在悬浮状态下即可生长的细胞。 贴壁型 粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式。基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须粘附于一固相表面才能生存和生长. 培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于贴壁型细胞。  1、成纤维细胞型：胞体呈梭型，中央有卵圆形核，胞质突起，生长时呈放射状。除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管内皮等常呈本型状态。培养中细胞的形态与成纤维类似时皆可称之为成纤维细胞。 2、上皮型细胞：细胞呈扁平不规则多角形，中央有圆形核，细胞彼此紧密相连成单层膜。生长时呈膜状移动，处于膜边缘的细胞总与膜相连，很少单独行动。起源于内、外胚层的细胞如皮肤表皮及其衍生物、消化管上皮、肝胰、肺泡上皮等皆成上皮型形态。 3、游走细胞型：呈散在生长，一般不连成片，胞质常突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细胞相区别。 4、多型细胞型：有一些细胞，如神经细胞难以确定其规律和稳定的形态，可统归于此类。  成纤维细胞样细胞 名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的 来源：由中胚层间充质组织起源的组织 如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞， 血管内皮 形态：似体内成纤维细胞的形态胞体梭形或不规则三角形 胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核 鸡胚胎成纤维细胞 成纤维细胞贴壁和扩展过程 上皮样细胞 贴壁型细胞附着在某一固相支持物表面才能生长，贴壁后呈现特定的形态特征。如图所示的细胞类型称为 . 悬浮型细胞 4.1.2 培养细胞的生长特点正常动物细胞培养的典型特征（P39） 核型（染色体）正常，表明没有明显的基因改变 细胞的传代次数大约在50代左右，有限的寿命反应了细胞的生长调节 细胞无恶性，表现在将该细胞注入免疫抑制动物不能形成肿瘤； 贴壁依赖、接触抑制和密度抑制表明其增殖受到抑制，当细胞在介质表面生长至汇合单层时增殖就停止。 接触抑制 细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制（Contact Inhibition）。 细胞接触汇合成片后，虽发生接触抑制，只要营养充分，细胞仍然能够进行增殖分裂，因此细胞数量仍在增多。但当细胞密度进一步增大，培养液中营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，则发生密度抑制，导致细胞分裂停止。 Contact Inhibition 4.1.3 培养细胞的生长与增殖过程 1 单个细胞的生长过程 Living Cell Dynamics 4.1.4 培养细胞的遗传学特征 染色体 细胞性别 核型正常 Barr body 定义：在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，此即为巴氏小体，又称X小体，通常位于间期核膜边缘。 1949年，美国学者巴尔（M.L.Barr）等发现雌猫的神经细胞间期核中有一个深染的小体而雄猫却没有。在人类，男性细胞核中很少或根本没有巴氏小体，而女性则有1个。以后研究表明，巴氏小体就是性染色体异固缩的结果。 Barr body 巴氏小体的失活是随机的 4.1.5 体内外细胞的差异及培养细胞的分化 体内外细胞的差异 培养细胞的分化 4.2 细胞培养液 4.2.1 细胞培养的常用液体 水 平衡盐溶液 消化液 消化酶抑制剂 pH调整液 抗生素液 谷氨酰胺补充液 PBS: Phosphate buffered saline磷酸盐缓冲液 PBS is a solution commonly used in biological research. PBS has many uses because it is isotonic and non-toxic to cells. It can be used to dilute substances. 4.2.2 培养基 细胞培养基的基本要求 体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。 无毒、无污染 体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染（