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　　丁酸钠诱导Raji细胞基因表达的变化论文 张海涛 伍俊 汪亚君 郭黠 冯哲玲 梁念慈 朱振宇 马涧泉 【摘要】 目的分析丁酸钠诱导Raji细胞的基因表达变化，探讨丁酸钠诱导凋亡作用机制。方法限制性显示PCR技术(Restriction Display PCR，RDPCR)分析基因表达变化，利用互联网提供的GenBank核酸数据库分析比对获得的差异表达序列。结果获得14条差异表达序列，其中6条是对照组高表达序列，8条是实验组高表达序列。结论采用RDPCR技术可以快速简便地分析药物诱导基因表达变化。分析表达差异的序列发现，丁酸钠可诱导促进细胞凋亡的基因表达，降低肿瘤细胞高表达的基因表达。 【关键词】 限制性显示PCR技术；丁酸钠；凋亡；基因表达 Change of Gene Expression in Raji Cells Induced by Sodium Butyrate Abstract：Objective This study echanism of apoptosis induced by sodium butyrate. MethodsThe change of gene expression butyrate. ConclusionThe change of gene expression induced by drugs could be analyzed by RDPCR methods quickly and simply. Gene expression that prompted cell apoptosis butyrate or cells butyrate； Apoptosis； Gene expression 0引言 Raji细胞是悬浮状态生长的，但我们前期研究发现Raji细胞在丁酸钠的处理下可由悬浮生长状态转变为贴壁生长状态，伴随有细胞凋亡现象的发生1。我们研究小组拟通过RDPCR显示mRNA表达差异来揭示丁酸钠诱导Raji细胞凋亡时基因表达的变化，试图寻找造成细胞发生形态学变化的主要基因，探讨丁酸钠作用的可能机制。 1材料和方法 1.1主要试剂丁酸钠(SB)， 溴化乙锭（Sigma公司）； DNA回收试剂盒（QIA quick Gel Extraction Kit Protocol， 德国QIAGEN公司）； mRNA纯化试剂盒（Omega Biotek公司）， 限制性内切酶Sau3AI， DNA连接试剂盒， LA Tag酶， RNasin， T4 DNA 连接酶， dNTP， PMD18T Vector， JM109细菌（大连宝生物公司）； 丙烯酰胺， N， N’–甲叉双丙烯酰胺， 琼脂粉， 琼脂糖， Tag酶， 低熔点琼脂糖（上海生物工程公司）； 胰蛋白胨， 酵母提取物(英国OXIOD公司)； Tris饱和酚（鼎国生物工程公司）； 逆转录酶， TRIzol试剂， DEPC（Invitrogen公司）； RPMI1640（Gibco公司）； 小牛血清（杭州四季青公司）； 100bp DNA Ladder（Bebco公司）； 氯仿， 异丙醇（国产分析纯）。 1.2细胞培养Raji细胞株(来源于中山大学肿瘤防治中心)以含10%小牛血清的RPMI1640培养液于5% CO2中培养。 1.3细胞mRNA的提取将生长状况良好的Raji细胞接种在6孔培养板中，细胞浓度为1.0×106/ml，加入3mmol/L丁酸钠，37℃、5% CO2培养。总RNA的提取按照Invitrogen公司提供的TRIzol试剂说明书进行操作。最后加30μl DEPC处理水溶解总RNA。参照mRNA纯化试剂盒说明书（Omega Biotek公司）操作，从总RNA中纯化mRNA。 1.4从mRNA反转录成为cDNA及双链cDNA末端平滑化 逆转录按照Invitrogen公司的说明书进行逆转录，mRNA约2μg，dNTP 0.5mmol/L，Oligd T15 0.1μmol/L，65℃，5min，加MMLV 200U和酶反应缓冲液，37℃延伸时间75min。cDNA样品20μl，70℃，10min。加入5μl T4 DNA Polymerase， 5μl 10×T4 DNA Polymerase Buffer，5μl 0.1% BSA，3.5μl 2.5mmol/L dNTP，12.5μl灭菌水，轻柔混匀。37℃反应5min。加入25μl EDTA(pH 8.0) 和25μl 10%的SDS，轻柔混匀，停止反应。加入100μl酚/氯仿溶液，振荡，混匀。10000g离心1min，液相分离，将上层水相转移至另一微量离心管中。加入1/10体积3mol/L NaAc（pH 5.2）、2.5