丹参对冻融小鼠卵巢同种异体移植后卵泡存活率的影响及其作用机制论文.docVIP

　　丹参对冻融小鼠卵巢同种异体移植后卵泡存活率的影响及其作用机制论文 林海燕 熊成容 朱琴 吴丹丹 唐飞 周颖 【摘要】 目的 ：探讨丹参注射液对冻融小鼠卵巢同种异体移植缺血低氧损伤的保护作用及可能机制。方法：收集B6C2F1第1天新生(D1)小鼠卵巢，慢冻速融后移植至B6C2F1代8～12周雄鼠的肾被膜下，移植后小鼠按给药不同分为对照组和丹参组，分别于移植后1 d（24 h）、2 d(48 h)和14 d回收移植物，进行超氧化物歧化酶（SOD）及诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的RT-PCR半定量测定，同时移植后14 d回收移植物做HE染色全卵巢卵泡计数及PA免疫组化分析。结果：移植后各时间段卵巢组织SOD mRNA的表达，丹参组均高于对照组，而iNOS mRNA的表达则均低于对照组。移植后14 d回收全卵巢总卵泡数.freelRNA的表达，抑制iNOS mRNA的表达而改善冻融小鼠卵巢同种异体移植缺血低氧性损伤，从而提高卵泡的存活率。 【关键词】 丹参；卵巢；冷冻保存；移植 Abstract: Objective: To explore the protective effects of danshen injection on ischemia injury in heterotopically grafted neouse ovaries. Methods:Ovaries from B6C2F1 neice ale mice.The mice ice 1 d， 2 d and 14 d oved to assess the mRNA expressions of SOD and iNOS 14 d munohistochemically for PA. Results: SOD-mRNA expression of ovarian tissue in the duration period after transplantation RNA expression ber of follicles in 2 ore than that of control group （1 889±202）.There provement in survival rate from 44.7% to 64.1% if host animals inistered ay improved the survival rate of ovaries by reducing ischeamia injury in heterotopically grafted neouse ovaries RNA expression and the decrease of iNOS-mRNA expression. Key a公司）；兔抗增殖细胞核抗原（PA）多克隆抗体、SP免疫组化试剂盒（北京博奥森生物技术有限公司 ）；反转录试剂盒（TAKARA）；KRYO10-22seriesⅢ程序冷冻仪(英国Planer公司)；ThemoHybaid PCR仪(英国TECHNE公司)。 1.3 实验方法 1.3.1 卵巢的收集，低温保存和解冻：断颈处死1日龄受体雌鼠，体视显微镜下分离卵巢，放入L15液中，去掉卵巢周围的包膜，卵巢转移至冷冻液（L-15、10% FBS和1.5 mol/L DMSO)中，再把10～12枚卵巢转移至0.25 mL的塑料麦管中，并用聚乙烯氯化物粉末密封细管。采用Gosden的慢冻方法进行冷冻，最后投入液氮保存。卵巢移植时把冷冻保存1周至6个月的卵巢麦管从液氮中取出，在空气中放置20 s，然后快速投到室温水中10～20 s，取出卵巢转移至L15(含10% FBS)液中。在L15液(含10% FBS)中多次漂洗以去除其中的抗冻剂。 1.3.2 卵巢移植：8～12周龄的雄鼠作为受体，麻醉后背部切开显露双侧肾脏，用锐利镊在肾囊上撕开一个洞，把解冻的卵巢塞入到肾囊中，每侧一个。 1.3.3 实验分组与移植卵巢回收：将受体小鼠按给药不同分为两组：对照组和丹参组，各40只，分别于移植前1 d至回收当日每天腹腔注射0.5 mL生理盐水和0.5 mL(含0.15 g)丹参注射液。于移植后1 d、2 d和14 d三时间段回收。各时间段小鼠卵巢放入RNA-latter液中用于SOD mRNA及iNOS mRNA的RT-PCR半定量测定，同时移植后14 d回收移植物固定、石蜡包埋用来做HE染色及PA免疫组化分析。实验中另取移植后14 d大B6C2F1雌性小鼠新鲜卵巢10个固定包埋作为卵巢卵泡计数的新鲜组。 1.4 观察指标与方法 1.4.1 组织学检查和全卵巢卵泡计数：移植后14 d回收和14 d新鲜卵巢，在Bouin’s液中固定过夜，石蜡包埋