丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制论文.docVIP

　　丹参酮ⅡA对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及机制论文 李浩，刘开祥，俸军林，曾爱源，唐永刚 【摘要】 目的探讨丹参酮ⅡA（Tan ⅡA）对缺血再灌注损伤大鼠保护作用及对额顶部皮质中性粒细胞浸润、自由基含量、能量代谢的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、Tan ⅡA低剂量治疗组和Tan ⅡA高剂量治疗组，线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型。Tan ⅡA高、低剂量治疗组于术前连续灌胃给药3 d，1次/d。用生化法观察缺血90 min再灌注24 h大鼠额顶部皮质髓过氧化物酶（MPO）活性、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛（MDA）含量、三磷酸腺苷（ATP）含量及脑含水量变化，并进行2.freelic frontal and parietal cortex of cerebral ischemia reperfusion（I/R） rats.MethodsIn this experiment, rats ly divided into 4 groups, namely sham operated group, I/R group,loiddle cerebral artery occlusion(MCAO) model ade by suture-occluded method.Rats in MCAO folloic frontal and parietal cortex e.Resultspared e in loanner (all P 0.05). pared ay aueviate cerebral ischemia-reperfusion injury by decreasing the inflammation reaction , free radicals and the disbanlance of energy metabolism. Key ia-reperfusion; Myeloperoxidase; Free radical; ATP；Tanshinone ⅡA 丹参Salvia miltorrhiza Bge为唇形科多年生草本植物，是我国传统具有活血化淤作用的中药，已被广泛用于心脑血管疾病的治疗，但其作用机制尚不十分清楚。丹参酮( Tanshinone)是丹参的有效活性组分，其中丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA，Tan ⅡA） 为丹参酮中含量最高的活性成分。本实验采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，研究丹参酮ⅡA对大鼠脑缺血再灌注损伤缺血区额顶部皮质中性粒细胞浸润、自由基含量、能量代谢、脑组织含水量及梗塞体积变化的影响，探讨其对脑再灌注损伤保护作用机制。 1 材料与方法 1.1 药品与试剂 Tan ⅡA由提供上海第一生化药业有限公司提供，纯度85％。髓过氧化物酶（MPO），丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒均购于南京建成生物工程研究所。TTC购自中国医药集团上海化学试剂公司。 1.2 动物分组及给药方法 健康PO活性的测定 再灌注24h，将大鼠开颅取脑，置于4℃冰箱5 min，在冰浴下取左侧距离嗅球尖端7～11 mm之间的额顶部皮质，以试剂盒提供的匀浆介质制成脑组织匀浆。严格按试剂盒说明书步骤要求操作，计算出MPO活力单位。 1.5 MDA和SOD的测定 再灌注24h，将大鼠开颅取脑，置于4℃冰箱5 min，在冰浴下取左侧距离嗅球尖端7～11 mm之间的额顶部皮质，以试剂盒提供的匀浆介质制成脑组织匀浆（步骤和方法同上）。严格按试剂盒说明书步骤要求操作，计算出MDA和SOD含量。 1.6 三磷酸腺苷（ATP）含量测定 再灌注24 h，将大鼠开颅取脑，置于4℃冰箱5 min，在冰浴下取左侧距离嗅球尖端7～11 mm之间的额顶部皮质，迅速加入乙腈，混匀，冰浴离心脱蛋白，离心后取上清液水系滤膜过滤后，-86℃保存。用高效液相测定ATP含量。 1.7 脑含水量检测 再灌注24 h，各组随机取5只大鼠，断头取脑后，快速称取左右大脑半球湿重，置110～115℃烤箱内烤至恒重，再分别称其干重，用(湿重- 干重) /湿重的百分比，作为衡量脑含水量指标。 1.8 TTC染色 再灌注24h，将各组另外5只大鼠深麻后开颅取脑。将鼠脑置于－4℃冰箱20min后，将其切成5等份冠状位切片，置于2％TTC溶液中，水浴、多聚甲醛液固定。用计算机病理图像分析仪及梯形法计算出梗塞灶体积，各脑片梗死灶体积之和即为梗塞体积。左侧大脑半球梗死灶区呈白色，主要为额顶部皮质和尾壳核，正常组织呈红色。部分组织表现为由白色向红色过度区。 1.9 统计学方法 数据处理采用SPSS11.5统计软件进行运算，结果以±s表示，组间差异显著性检验采用方差分析。 2 结果 2.1 TAN Ⅱ