临床基因扩增标本的留取及核酸提取方法.ppt

PCR (Polymerase Chain Reaction) 1983 Cetus 公司的 Kary Mullis于12月16日第一 次成功实验发明了PCR 1985 关于PCR 的文章首次由 Kary Mullis及其同事等人 在《Science》上 发 表 1989 12月《Science》杂志将PCR和它所使用的Taq DNA聚合酶命名为第一个“年度分子”。 1993 Kary Mullis，Nobel Prize in Chemistry Ct值的意义 一 感染性疾病 　 1. 病原体含量与病情之间的关系 　 2. 病原体含量与用药之间的关系 　 3. 药物及疗法的研究与开发 　 4. 新的病原体分子诊断标准 　 5. 新的愈后指标 　 6. 传染病发病的监控、预测与预防 荧光定量PCR在病原体检测中的应用 一 肝炎病毒定量检测 二 性病病原体检测 三 结核杆菌及呼吸道病原体检测 四 优生优育(TORCH)相关项目检测 （一） 乙型肝炎病毒结构及特点 HBsAg：是HBV感染的主要标志 HBsAb：保护性抗体 HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内， 　　　　一般不存在于血循环中 HBcAb: 非保护性抗体，HBcAb-IgM 　　　　提示HBV处于复制状态 HBeAg：HBV复制及强感染性的指标 HBeAb：有一定的保护作用，预后良好 （二） HBV-DNA与“两对半” 3. 血清学指标(－)不能排除HBV感染。 HBV感染与干扰素治疗 治疗前： a: 治疗前HBV低水平复制者对干扰素的反应性明 显优于高水平复制者。 b: 治疗前HBV DNA 含量特别高者大多没有疗效。 c: HBsAg转阴的几乎都是那些治疗前血清HBV DNA 含量较低者。 病毒特点： 1. 单正链RNA病毒 2. E1和E2区基因高度变异性 (二)　HCV-RNA定量检测的临床意义 1. 早期诊断 a. 临床以 80 copy/ml做为无感染或治愈标准。 b. HCV感染1-3W，即可检出HCV-RNA的存在。 c. 严格筛选献血员 ,提高对窗口期感染者的检出率。 d. 医疗纠纷中的“举证倒置”，病人入院前后进行HCV-RNA检测。 二　常见性传播疾病病原体 一　淋球菌（NGH） 二　沙眼衣原体（ CT ） 三　解脲脲原体（UU） 四　梅毒螺旋体（TP） 五　单纯庖疹病毒（HSV） 六　乳头瘤病毒（HPV） 七　人类免疫缺陷病毒（HIV） 八 EV71 A16 通用型 艾滋病 艾滋病是英文AIDS（Acquired Immunity Deficiency Syndrome) 的中文译音，全称是“获得性免疫缺陷综合征”。它可以由人类免疫缺陷病毒（HIV,Human-being Immunity Deficiency Virus ），又称艾滋病病毒引起的疾病。当病毒侵入人体后，经一段时间的潜伏期，破坏人体的免疫力，从而发病，病死率高，是一种严重的传染病。 艾滋病是一种有明确病原体的可通过人之间一定传播途径传播的慢性传染病，属于《传染病防治法》中规定的乙类传染病 HIV病毒：多亚型和多变异 HIV-1和HIV-2 M组、O组和N组 亚性型：A-K CRF：基因重组亚型，主要是HIV-1型 毒株亚型监测的意义 不同亚型与不同传播途径的关系：B主要通过男性同性性行为和静脉注射吸毒传播，C主要异性性接触传播 流行地理和传播线路的分析：东南亚区域的C亚型和B亚型 重组亚型传播效力变化及对流行的影响：东欧的B/A重组流行、泰国的A/E重组 艾滋病病毒在外界的抵抗力 HIV病毒一旦离开宿主细胞在外界环境中生存能力很快消失 HIV对环境中的物理因素和化学因素抵抗力均较弱，比乙型肝炎病毒（HBV）的抵抗力低得多 对HBV有效得消毒和灭活方法均适用于HIV  典型进展者：8-10年潜伏期后成为艾滋病人，80% -90% 快速进展者：CD4细胞2-5年内迅速下降，HIV病毒载量一直维持较高水平，而且分离的HIV有均一性。 长期存活者（又称长期不进展者）：维持15年以上，而且CD4计数维持正常，在所有感染者中比例一般在8%-10%。 艾滋病的诊断 HIV感染者：确定HIV感染的个体 抗体检测：初筛和确认 辅助诊断 艾滋病病人：临床诊断