【2017年整理】四与细胞凋亡及其调控的分子机制唐旭东级研究生.ppt

细胞凋亡的基本概念 细胞凋亡（apoptosis)---形态学概念 或程序性细胞死亡（programmed cell death , PCD）--- 功能性名称 是指多细胞有机体在正常生理或病理状态下发生的一种由多基因控制的一种自发的、程序化的死亡过程。 2. 细胞核的变化 核内染色质凝聚、形成染色质块，并聚集于核的边缘呈多种形状排列（如：新月形），然后逐步分裂为碎片（核碎片形成）。 Morphological Features of Apoptotic Cells 4. 凋亡小体(apoptotic body)的形成 * 凋亡小体的概念 指凋亡的最后阶段，由胞质分割形成大小不等，含有细胞质膜、细胞器及核碎片的膜包被小体。 * 形成机制 （1）细胞表面突起形成-------包裹膜融合、根部缩窄→脱落 （2）胞内自噬体形成-------向胞外释放 应注意：有时凋亡细胞膜不分割，仅发生核固缩和胞质高度浓缩成单个致密结构亦称凋亡小体。 凋亡时细胞的形态学改变 （三）细胞凋亡的生化特点 1. DNA片段化（主） 凋亡细胞DNA经琼脂糖凝胶电泳呈特征性梯状条带图谱（ladder）。 机制： 核小体中的组蛋白与DNA的连接键断裂，内源性核酸内切酶被激活，有控制的特异地将DNA降解为180~200bp整数倍大小的若干条带。 DNA Fragmentation 2. 其它生化改变 1) 胞浆Ca2+ 和H+水平 凋亡的发生伴随胞浆Ca2+和H+水平的升高。 2) 细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻 膜磷脂的不对称性分布改变, 凋亡时PS由质膜内侧翻向外侧（早期特征） 3) 线粒体 细胞凋亡时，呼吸链受损，ATP合成下降，线粒体跨膜电位(mitochondrial transmembrane potential, Δψm)下降；膜通透性增加。 （三）细胞凋亡与坏死的区别-1 细胞凋亡与坏死的区别-2 二、细胞凋亡的生物学意义 对于多细胞个体发育至关重要 对于淋巴细胞的成熟和维持免疫系统的功能至关重要 与DNA的损伤修复密切相关 与衰老密切相关 秀丽隐杆线虫（Caenorhabditis elegans) 凋亡活化基因：ced-3 ced-4 凋亡抑制基因：ced-9 哺乳动物： Ced-3—Caspase 家族 Ced-9---Bcl-2 家族 Ced-4--凋亡活化基因1 (apoptosis-activating factor-1,Apaf-1) （一）caspase家族与细胞凋亡 Caspase即天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶(Cysteinyl aspartate-specific protease); 是一类与白介素-1? 转化酶/线虫凋亡基因Ced (ICE/Ced)同源的一类半胱氨酸蛋白酶; 活性位点含有保守的aa序列(QACXG, X为R,Q或G); 以无活性的酶原形式合成并存在于细胞中； 可以被上游Caspase或自身切割保守的Asp活化； 已在哺乳类中发现18种，分为3个亚类： Caspase-1亚家族，Caspase-2亚家族，Caspase-3亚家族（ -3、-6、-7、-8、-9、-10） 亦可根据前体分子(procaspase)N端的原结构域(prodomain)分为2类: 启始分子(initiator)：具“Long-prodomain” 如-8、-9、-10等，为蛋白酶级联反应的启始者，其活化后再切割和活化下游Caspase； 效应分子(effector)：具“short-prodomain”，如-3、-6、-7等，作为上游酶的底物被切割活化，再作用于多种蛋白质或酶，促使细胞凋亡。 2. Caspase的结构特点和活化机制 3. Caspase活化的级联反应过程 多种凋亡因素，通过多种途径活化Caspase; 凋亡时起始Caspase首先被活化,其后又切割并活化下游Caspase,级联放大,直至效应Caspase被活化； 细胞中的Caspase一旦被活化,凋亡即不可避免。 4. 效应caspase引起细胞凋亡的机制 灭活细胞内凋亡抑制蛋白 非凋亡细胞中, caspase活化的DNase (CAD)与其抑制蛋白(ICAD)结合; 凋亡细胞中, caspase剪切ICAD 剪切细胞结构蛋白 在凋亡过程中, caspase在单一位点剪切核纤层蛋白(lamin), 导致核板塌陷, 染色质浓缩. 剪切效应蛋白 聚（腺苷二磷酸-核糖）多聚酶 [P