微生物遗传学复习考题.docVIP

简述题 串联亲和纯化方法 (Tandem affinity purification , TAP)经过两步连续的亲和纯化获得接近自然条件的特定蛋白质复合体后用质谱技术或Edmn降解法进行蛋白质鉴定。与传统的研究蛋白质相互作用的技术相比，TAP技术具有周期短、假阳性结果少等优点。 显性失活突变 (Dominant Negative Mutation)显性突变 只有单个基因拷贝即可导致野生型基因产物失去活性的突变体。在信号转导领域中指本身失去转导信号功能，而且同时能使野生型蛋白也失去活性的信号转导蛋白突变体。可导致相关信号通路的组成性阻断。 基因敲除突变即用一个突变的基因去修饰其对应的野生基因，以观察中止原基因正常功能时的生物学变化。或指用DNA重组技术敲除宿主基因组中的某一靶基因。以小鼠为例，先将待敲除基因制成缺失突变而代之以一个选择基因(如neo )，同时再接上另一个选择基因(如tk)，然后将这一段已失去靶基因功能的DNA插入载体，转入在体外培养的小鼠胚胎干细胞——ES细胞。通过细胞内同源重组将基因组中有功能的靶基因置换掉，也就是敲除了靶基因。只有同源重组的整合，才能把接在靶基因旁边的选择基因去掉;非同源重组则会把失去功能的靶基因序列连同两个选择基因一起整合在ES细胞基因组里。这样，用选择培养基就可选出敲除了靶基因的胚胎干细胞克隆。将这种胚胎干细胞注入小鼠早期胚胎。由于胚胎干细胞是二倍体细胞，所以靶基因被敲除的干细胞是该基因的杂合体，即只有一个等位基因被敲除。功能互补(complementation)实验 合成遗传列阵分析(Synthetic genetic array, SGA) 联合致死/致病作用(synthetic lethal/sick interaction) ,重组产生的后代不能存活或活力减弱的现象被称为联合致死/致病作用. 温度敏感突变株 asci are linear, and are produced by sporulation of a diploid strain. The ascus looks like a single cell. The spores look more tightly packed. 子囊是线性的,是由一个二倍体孢子形成的。这个子囊看起来像一个单一的细胞。孢子很紧凑 10. 什么是蛋白质标签 (tag),用途是什么? 是基因移植到一个重组蛋白。通常,这些标签是可移动的化学制剂或酶的手段,如蛋白质水解或蛋白拼接。标签是基于各种目的而附在蛋白质上的 用途:分离和纯化蛋白(包括蛋白复合物)并鉴定与YFP结合的蛋白(TAP) 亚细胞定位（GFP) 测定YFP的表达（FLAG, HA, Myc)分析蛋白质之间的相互作用（FLAG, HA, Myc) 11. 易错PCR 易错PCR?是在采用DNA聚合酶进行目的基因扩增时，通过调整反应条件，如提高镁离子浓度、加入锰离子、改变体系中四种的dNTPs浓度或运用低保真度DNA聚合酶等，来改变扩增过程中的突变频率，从而以一定的频率向目的基因中随机引入突变，获得蛋白质分子的随机突变体。其关键在于对合适突变频率的选择，突变频率太高会导致绝大多数突变为有害突变，无法筛选到有益突变;突变频率太低则会导致文库中全是野生型群体。理想的碱基置换率和易错的最佳条件主要依赖于突变的DNA片段的长度。由于大片段插入、缺失或重排而导致基因产物完全无效　某些信号转导蛋白突变后不仅自身无功能，还能抑制或阻断同一细胞内的野生型信号转导蛋白的作用。这种作用被称为显性负性作用。具有显性负性作用的突变体被称为显性负性突变体 简述正向遗传学（forward genetics）和反向遗传学（reverse genetics）的不同之处。正向遗传学是指，通过生物个体或细胞的基因组的自发突变或人工诱变，寻找相关的表型或性状改变，然后从这些特定性状变化的个体或细胞中找到对应的突变基因，并揭示其功能。反向遗传学的原理正好相反，人们首先是改变某个特定的基因或蛋白质，然后再去寻找有关的表型变化。简单地说，正向遗传学是从表型变化研究基因变化，反向遗传学则是从基因变化研究表型变化。简述蛋白质在遗传上的相互作用（genetic interaction）和物理相互作用（physical interaction）的区别。两基因通过比较二者共同突变的表型，与二者单独突变的表型。这种相关作用指重复的生物过程或并行途径中的重复功能所需基因，不需要蛋白之间有直接的作用。蛋白遗传相互作用指两种基因同时存在成删除后表型表现出来。 指当两种蛋白质直接或间接接触时他们之间的相互作用，当两种蛋白质存在生理上的相互接触时，蛋白质间的相互作用，无论之间或间接的（如在同一蛋白质复合体中）。 3. 简述合成或联