第四章第二节.pptVIP

(1)加热使DNA双链间的________键完全打开，称为________；而在细胞中是在________酶的作用下进行的。 (2)如果只需要大量克隆模板DNA中间的某个特定区段，应该加入________种特定的引物。当温度降低至56 ℃时，引物与两条“舒展”的模板的特定位置结合，在DNA聚合酶的作用下，只能在引物的________端连接脱氧核苷酸，两条子链的延伸方向都是___________________。 (3)PCR技术的必需条件，除了模板、原料、酶之外，至少还有三个条件，即液体环境、适宜的________和________，前者由________自动调控，后者则靠________来维持。 (4)通过PCR技术使DNA分子大量复制，如果将一个用15N标记的DNA分子放入试管中，以14N标记的脱氧核苷酸为原料，连续复制四次之后，则15N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例是________。 【解析】　(1)PCR技术利用热变性原理使DNA双链之间的氢键断裂，称为变性，而在细胞内是在解旋酶的作用下使氢键断裂。(2)PCR分为三个基本反应步骤：变性(94 ℃)、退火(40 ℃～60 ℃)、延伸(72 ℃)，其特异性依赖于与靶序列互补的引物，引物是两段与待扩增DNA序列互补的片段，两引物之间的距离决定扩增片段的长度。由于DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从引物的3′ 端延伸DNA链，则DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 (3)PCR技术与细胞内的DNA复制不完全相同，除了需要模板、原料、酶以外，至少还需要液体环境(稳定的缓冲液)，每一个步骤需要适宜的温度和酸碱度等。(4)一个DNA分子连续复制四次之后，形成16个DNA分子，15N标记的DNA分子有2个，则15N标记的DNA分子占全部DNA分子总数的比例为1/8。 【答案】　(1)氢 　变性 　解旋 (2)两 　3′ 　从子链的5′端向3′端延伸 (3)温度 　酸碱度 　PCR自动扩增仪 　缓冲液 　(4)1/8 互动探究 (1)PCR中碱基错配会引起哪种变异？ (2)假设对一个DNA进行扩增，第一次循环时某一条模板链上发生碱基错配，则扩增若干次后检测所有DNA的扩增片段，与原DNA相应片段相同的占多少？ 【提示】　(1)基因突变。 (2)50%。 变式训练 2. (2012·信阳高二质检)如图表示PCR扩增的产 物，请分析它是哪次循环的产物(　　) A．第一次循环 B．第二次循环 C．第三次循环 D．第四次循环 解析：选A。在PCR反应中以引物为标记，第一次循环时，以加入的DNA为模板，两条DNA链可分别与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合，并在DNA聚合酶的作用下延伸，所以，形成的每个子代DNA中只有一种引物。从第二次循环开始，第一次产生的DNA分子又可作为模板参与反应，形成的DNA分子两端都含有引物。 实验探究?专项突破 【操作与实践】 1.操作流程 目的DNA片段的体外扩增 2.注意事项 (1)为避免外源DNA等因素的污染，实验中使用的一些用具在使用前必须进行高压灭菌。 (2)所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－20 ℃储存。 (3)在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。 (4)EB是一种致癌物，在实验过程中要做好防护工作，如戴塑料膜防护手套；在紫外灯下观察时要戴上专用护眼镜！ 【问题与探究】 1.你明白PCR技术原理吗？ 【提示】　在用PCR技术扩增DNA时，DNA的复制过程与细胞内DNA的复制类似。PCR技术利用了DNA的热变性原理：在94 ℃的高温 下，作为模板的双链DNA解旋成为单链DNA，当温度缓慢降低后，引物与模板的单链DNA的特定部位互补配对，再升高温度后，引物链延 伸，形成互补的DNA双链。 2.你了解PCR反应的条件吗？ 【提示】　(1)稳定的缓冲液环境。 (2)DNA模板。 (3)分别与模板DNA两条模板链相结合的两种引物。 (4)A、T、G、C四种脱氧核苷酸。 (5)耐热的DNA聚合酶，一般用Taq聚合酶。 (6)能严格控制温度变化的温控设备。 3.如何判断DNA片段的扩增是否成功？ 【提示】　(1)可以通过计算DNA含量来评价扩增的效果。 (2)电泳检测法，可以通过在紫外灯下观察荧光带的多少来评价扩增的效果。 【例题】　下列有关PCR技术的叙述，不正确的是(　　) A．PCR技术是利用碱基互补配对的原则 B．PCR技术可用于基因诊断、判断亲缘关系等 C．PCR技术需在体内进行 D．PCR技术经过变性、退火、延伸三个阶段 【解析】　PCR技术是聚合酶链式反应的简 称，是在体外快速大量复制DNA片段的一种新技术。 【答案】　C 知能演练?轻巧夺冠 本部分内容讲解结束 按ESC键退出全屏播放