人干细胞生长因子cDNA克隆、表达和纯化及其造血种属特异性论文.docVIP

人干细胞生长因子cDNA克隆、表达和纯化及其造血种属特异性论文.doc

  1. 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
人干细胞生长因子cDNA克隆、表达和纯化及其造血种属特异性论文.doc

  人干细胞生长因子cDNA克隆、表达和纯化及其造血种属特异性论文 .freelan stem cell gro-dependent carbohydrate recognition domain,CRD)内缺失78氨基酸的截短型分子hSCGFβ。hSCGFβ的造血刺激活性具有严格的种属特异性。本研究目的在于探讨hSCGF能否协同刺激小鼠粒/单系祖细胞增殖。为克服hSCGF的cDNA GC含量较高的困难,本研究以两步PCR的方法从人胎肝cDNA文库(Clontech)中成功克隆hSCGF cDNA,进而将hSCGF成熟肽编码序列亚克隆于原核表达载体pGEX4T-2中,融合表达。研究结果表明,通过低温诱导(28℃),重组表达产物主要以可溶蛋白的形式存在于裂解上清中,利用亲和层析纯化融合表达蛋白。对重组蛋白的造血刺激活性分析表明,不同于截短型分子hSCGFβ,全长分子hSCGF能够刺激小鼠骨髓粒/单系造血祖细胞增殖。结论: hSCGF CRD不直接结合受体,可能具有其他生物学功能。 【关键词】 cDNA克隆 Cloning,Expression and Purification of Human Stem Cell Groatopoiesis Abstract Stem cell groatopoitic cytokine that has ts including hSCGF olecules and hSCGFβ,78 amino acids of -dependent carbohydrate-recognition domain (CRD).It has been demonstrated that hSCGFβ is strictly species-specific in regulating he-matopoiesis.This study ed to explore an SCGF can exert synergistic stimulatory effect on heterogenous murine CFU-GM progenitor.Firstly,hSCGF cDNA plified from human fetal liver cDNA library by using tature peptide coding sequence of glutathione S-transferase (GST) sequence in GST gene fusion expression vector. The results indicated that there existed an additional 60 kD protein pared ock BL21 id onstrated that the GST-hSCGF fusion protein mainly existed in insoluble form.io等[3]1998年分离得到人干细胞生长因子(human stem cell gro dependent carbohydrate recognition domain,CRD),因此属于C型凝集素(C-type lectin)超家族成员。hSCGF的另一命名为LSLCL,其基因已被定位于人染色体19q13.3,由4个外显子和3个内含子组成[4]。已知人干细胞生长因子具有两种形式,全长分子hSCGF和在CRD结构域内缺失78氨基酸的截短型分子hSCGFβ[5]。研究表明,截短分子hSCGFβ除具有协同刺激造血活性之外,还能协同VEGF诱导AC133阳性细胞向内皮细胞分化[5,6]。hSCGFβ的造血刺激活性具有严格的种属特异性,而全长分子hSCGF的同源性分析表明,人源hSCGF与鼠源的mSCGF在氨基酸水平上具有85.1%同源性,91%的氨基酸相似。为进一步探讨hSCGFβ的这种种属特异性是否与CRD结构域内部分缺失有关,本研究检测全长分子hSCGF能否协同刺激小鼠粒/单系祖细胞增殖。初步研究结果表明,hSCGF可以作用于小鼠骨髓粒/单系造血祖细胞。 材料和方法 材料 LA Taq DNA聚合酶(ega 公司产品。DNA连接酶,CIP(小牛肠碱性磷酸酶)以及各种限制性内切酶分别购自LTI、Promega及大连宝生物工程公司。原核融合表达载体质粒pGEX-4T2及宿主菌BL21(DE3)均为本院陆承荣博士惠赠。亲和层析柱GSTrap FF 购自Amersham Pharmarcia 公司。 hSCGF cDNA克隆及鉴定 引物 上游: 5′ CGCGAATTCGCCACCATGGAGGCAGCCTGGCTTTT 3′;下游: 5′ CGCGGATCC CTATTAGA

文档评论(0)

ggkkppp + 关注
实名认证
文档贡献者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档