人类ERMAP基因在不同胎龄胎儿组织中表达的研究论文.docVIP

　　人类ERMAP基因在不同胎龄胎儿组织中表达的研究论文 何新荣，何映谊，陈滢，叶铁真 【摘要】 人类ERMAP基因是新近发现的编码红细胞膜相关蛋白基因，其功能可能与红系造血活动有关。为探讨该基因在胎儿造血过程中的作用，收集9-36周难免流产胎儿共29例，分别抽提其肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺脏、胸腺、大脑、骨髓和肌肉等9种脏器组织的RNA，取其中胎龄25+5周（25周过5天.freelan ERMAP Gene in Fetal Tissues AbstractHuman ERMAP (hERMAP) is a novel gene coding for erythroid membrane-associated protein, ay play a role in erythropoiesis. To explore the role of hERMAP in fetal hematopoiesis, 29 fetuses of inevitable abortion the liver, spleen, kidney, heart, lung, thymus, brain, bone marrouscle, the RNAs from arro 12th- 21st-arro 15th 33rd e specimens of kidney, heart, lung, thymus, brain and skeletal muscle. It is concluded that the expression of hERMAP in fetal liver approximately consistent atopoiesis of fetal liver, and the expression of this gene in bone marroatopoiesis of fetal bone marroigration of erythroid cells to liver and bone marroent process. Key an ERMAP；fetal stage；haematopoiesis 近年来，Ye等［1-3］分别从鼠胚胎红细胞和人胎肝cDNA文库中筛选出编码红细胞膜相关蛋白（erythroid membrane-associated protein，ERMAP）基因，并证实其高度特异表达于胎肝、成人骨髓等造血组织以及K562和HEL细胞系，其编码的蛋白分子定位于网织红细胞和原始红细胞膜、293T细胞膜和其他胞浆小体上，分析显示其为一跨膜蛋白分子，属免疫球蛋白超家族成员。推测ERMAP可能通过细胞间的黏附和（或）识别，影响红系造血，或在红系相关性疾病、 自身免疫性疾病和其他疾病中起一定 作用。 目前关于该基因的特性与功能尚待进一步研究。本研究旨在通过观察人类ERMAP基因在不同胎龄胎儿各脏器组织中的表达谱及表达量的变化，探讨该基因在胎儿造血过程中的作用。 材料和方法 材料 收集2004年3月至2004年11月由广东省妇幼保健院、广州医学院第二附属医院、东山区妇幼保健院、海珠区妇幼保健院等医院妇产科提供的难免流产胎儿，胎龄不限。均排除胎儿先天畸形、孕母遗传性疾病、妊娠期间用药史。胎儿离开母体后立即取肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺脏、胸腺、大脑、骨髓和肌肉9种脏器组织，放入冻存管，置于-80℃冰箱保存。 方法 总RNA的提取称取50-100 mg组织置于研钵中，加入液氮研磨成粉末状，转移至含1 ml RNA-solv的离心管中，按照RNA-sol试剂（Omega公司产品）说明书提取RNA，置于-80℃保存。用紫外透射灯(Amersham公司产品)分析其纯度，要求OD260/OD280值在1.8-2.0。提取物经1%琼脂糖凝胶电泳证实为完整RNA。 ERMAP基因表达谱的Northern blot观察选取1个胎龄为25+5周(25周过5天）的胎儿，将上述9种脏器组织的总RNA在1%琼脂糖凝胶上甲醛变性电泳3小时（5 V/cm），在紫外分光光度仪下测量18S、28S条带到点样孔的距离，利用真空转移仪转膜2小时。然后以PCR方法分别标记ERMAP和β-actin探针（按照PCR DIG Probe Synthesis Kit试剂盒说明书操作，引物由北京赛白盛有限公司合成），ERMAP引物序列为5′-GAGATGGCGAGTTC TGCT-3′ ，5′-CACCGTCCTCCCCTTATA-3′ ，β-actin引物序列为5′ -CATCTCTTGCTCGAAGTCCA -3′，5′ -ATCATGTTTGAGACCTTCAACA-3′。对照管加入无DIG标记的dNTPs。探针变性后进行预杂交