RNAi特异性抑制食管癌细胞cathepsin+B基因表达的研究.pdf

郑州大学2007届硕士研究生论文 RNAi特异性抑制食管癌细胞cathepsinB基因表达的研究 食管癌等恶性肿瘤进行基因治疗提供实验依据。 材料和方法 液在37℃、5％C02条件下贴壁培养。 2．siRNA的体外合成和鉴定：首先合成DNA模板，5’端为T7启动子序列，可 长度和浓度。 siRNATransfection 3．转染：应用LipofectamineTM2000Reagent将siRNA转染细 三个转染剂量及正常、空白、无关三个对照。 4．转染后检测：应用完整细胞原位杂交、免疫细胞化学方法检测细胞内靶基因的 chamber体外侵袭实验检测细胞体外侵袭力的变化。 表达情况，应用Boyden 5．统计方法：应用SPSS10．0统计软件进行统计学处理，资料以均数±标准差 (一X±S)表示，多样本均数比较采用方差分析。a=0．05为显著性标准。 结果 1．成功体外合成两段siRNA，长度为21bp。 2． 有所降低，以转染72h的抑制效应最为明显，三者两两相比，差异均无统计 学意义(尸O．05)；每个时间段内随剂量增]／[IsiRNA抑制效应均增强，三者 两两相比，差异均有统计学意义(PO．05)；正常对照、空白对照、无关对 照均未表现出对CBmRNA表达的抑制效应，实验组与3者两两相比，差异均 有统计学意义(PO．05)。 照有所降低，以转染72h的抑制效应最为明显，三者两两相比，差异均无统 计学意义(胗0．05)；每个时间段内随剂量增力IsiRNA抑制效应均增强，三 者两两相比，差异均有统计学意义(pO．05)；正常对照、空白对照、无关 对照均未表现出对cB蛋白表达的抑制效应，实验组与3者两两相比，差异均 Ⅱ 有统计学意义(P0．05)。 chamber体外侵袭实验结果：与正常对照、无关对照相比，转染特 4．Boyden O．05)。 结论 1．应用体外转录系统成功合成siPdqA。 z 明RNAi可通过抑制CB表达，进而抑制食管癌浸润转移。 chamber体外侵袭实验结果表明，RNAi技术可通过抑制与肿瘤浸润 3．Boyden 相关基因表达，从而抑制肿瘤细胞侵袭能力。 关键词： RNA干扰；食管癌；短干扰RNA；特异性抑制：组织蛋白酶B m The about ofcath- study inhibitingspecificallyexpression B in carcinomacellsRNAi epsingeneesophageal by Xin Lou Postgraduate Tutor Chen ZhangHong Kuisbeng of BasicMedical DepartmentPathology,TheCollege．ZhengzhouUniveISity, Henan forTumor KeyLaboratoryPathology, 450052 Zhengzhou，Henan ABSTRACT RNA the of interference(RNAi)isprocesssequence-specificpost