T-2毒素的细胞毒性研究.pdf

摘要  T­2毒素是污染我国饲料的主要霉菌毒素，动物饲喂污染的饲料后会导致造血组 织和免疫器官损伤、引起出血性综合症、出现白细胞减少、贫血、胃肠道功能紊乱等 症状，因此，T­2毒素对畜禽健康和畜牧业生产的危害很大。 为了探讨T­2毒素对家畜的毒性机理及诱导凋亡的分子机制，首先采用T­2毒素对 猪的肝脏细胞进行暴露，暴露浓度为0、0.02、0.05、0.1 mg/L，暴露时间为48小时， 然后用基因芯片技术检测0.05mg/L处理组基因表达谱的变化。最后运用荧光定量PCR  检测两个关于药物代谢的细胞色素P450家族的CYP2D25和CYP51的基因表达情况验 证基因芯片的结果。结果表明，氧化应激和细胞凋亡相关基因发生上调，药物、脂质 代谢和细胞生长的基因发生下调。0.05mg/LT­2毒素暴露48h的猪肝细胞与对照组的猪 肝细胞相比，共有262个基因上调，231个基因下调。其中HSP90和HSP70类似蛋白的 基因（应激相关基因）上调，caspase­1、caspase­15 （凋亡相关基因）也上调；另一 方面，3­ β  羟基类固醇脱氢酶(脂质代谢)和细胞色素P450家族的CYP2D25和CYP51 （药 物代谢）基因发生下调，cyclin D1、D2 （细胞生长）相关基因表达也下调。 为了进一步探讨T­2毒素对细胞毒性的影响，改用T­2毒素对SW1353细胞进行暴 露，进行MTT检测细胞活性，荧光定量PCR检测P53、bcl­2、bax的基因差异情况，结 果表明T­2毒素能够明显抑制SW1353细胞活性，上调P53、bax的基因表达，下调bcl­2  的基因表达，从而诱导细胞凋亡。  T­2毒素对猪的毒性机制可能是：通过丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号途径 的激活，引起氧化应激，而氧化应激可以引起包括凋亡、生长受阻、转录因子激活等 多种细胞损伤，并且能够导致脂质过氧化，最后导致细胞凋亡。在细胞凋亡的同时， 药物代谢和脂质代谢受到抑制，表现为相关基因水平下调。 关键词：T­2毒素；肝脏细胞；SW1353细胞；凋亡 I  Abstract  T­2 toxin is a main mycotoxin to cause feed pollution, which harms hematopoietic tissues and  immune  organs of animals, and causes hemorrhagic syndrome, leukopenia, anemia, gastrointestinal  dysfunction.  To determine the effect of T­2 toxin in live cell of pig and learn molecular targets and mechanisms  of T­2 toxin induced apoptosis, the live cell of pig were treated with 0、0.02  、0.05  、0.1   mg/L of T­2 toxin  for 48 h. To examine the gene expression profiles, the live treated with 0.05mg/L were performed with  microarray analysis. Increased expression of oxidative stress­ and apoptosis­ related genes was detected  in the liver of pig, and decreased expression of cell growth，lipid metabolism­ and drug­ metabolizing  enzyme­related genes was also detected in live tissues. The expression of 262 genes was increased and  that of 231 genes was decreased by 0.05 mg/L T­2 toxin treatment at 48