Ⅰ型脊髓性肌萎缩症与线粒体基因组的相关性研究.pdf

I型脊髓性肌萎缩症与线粒体基因组的相关性研究 浙江大学医学院 医学遗传学 2005级硕士研究生 遣冬冬 导 师 张咸宁教授 中文摘要 研究背景 mmcular 脊髓性肌萎缩症(spinal atrophy，SMA)是一组常见的由于脊髓前角 细胞运动神经元退化变性所导致的进行性、对称性肢体近端和躯干肌肉无力瘫痪 及萎缩为特征的遗传性神经肌肉疾病。SMA发病率约为1／6000，杂合予频率高达 1／50，是仅次于囊性纤维变性(cystic 遗传病。根据患者的发病时间和临床症状，SMA可分为3种类型：SMAl 为致命性，是位居世界儿童死亡率第一位的“杀手”。患者通常在出生后6个月左 右发病，不能坐和行走，多于2岁之内因呼吸衰竭而死亡。目前，尚无缓解和治 疗SMA的措施。 ofmotor 运动神经元存活基因(survivalncuron，删)为SMA的主要致病基 常相似的拷贝，根据所处位置的不同，分别为端粒区拷贝：删1；中心粒区拷贝： SMN2。人SMNl和蚴基因可能是进化过程中通过基因转换形成的倒位重复 DNA序列。少数正常个体可能由于基因转换而缺失SMN2，仅具有m拼1。 可以作为SMA基因诊断的理论基础。 国外曾有报道，对于脊髓前角细胞运动神经元退化引起的肌肉萎缩，线粒体 2 DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)缺失可能为其次要因素。在一些具备SMA 临床症状但是SMN基因无突变缺失的患者中，肌肉组织活检发现线粒体呼吸链酶 c 复合体活动减少，同时细胞色素C氧化酶(cytochromeoxidase，COX)和，或胸 kinase 苷激酶2(thymidine2，TK2)发生突变。在一些散发性SMAl患者中，发 现存在细胞色素C氧化酶的合成(the of oxidase2，SC02) synthesis cytochrome 突变。关于SMAl的线粒体DNA突变信息国内外报道较少，对结论尚有争议。 研究目的 对汉族疑似SMAl患者的线粒体基因组全序列进行测序分析，以期探讨与 SMAl发病相关的线粒体因素。 研究对象 32例散发性汉族疑似SMAl患者和50例正常健康对照。 研究方法 (1)抽取患者和正常健康对照的外周血(抗凝)，苯酚．氯仿法纯化基因组DNA。 (2)运用错配聚合酶链反应．限制性片断长度多态性(PCR．RFLP)方法从基因角 度进一步对疑似SMAl患者确诊。(3)随机筛选10例患者及lO例正常健康对照， 软件进行mtDNA数据分析。 研究结果 为96．9％(31／32)。 无SMNl第7外显子缺失突变的患者线粒体全基因组序列中发现5个一致性突变： mutation)。 为同义突变(synonymous 结论 (mitochondrial I)。大部分代谢物脱下2H由氧化型NAD+ respiratoryeomplex 接受，形成还原型NADH。然后呼吸链酶复合体I负责将还原型NADH中的2H 吸链酶复合体I的功能，导致线粒体呼吸链出现异常，从而使SMAl患者出现肌 制区(control region，CR)即非编码区，属于多态性位点，通常被认为是非功能 nucleotide 性单核苷酸多态性(single 例散发性汉族SMAI患者中同时出现上述4个一致性突变，表明其在SMAI的发 病中(如进行性运动障碍、近端四肢无力等)可能具有某些作用，尚有待于今后 更深入的研究。 关键词：I型脊锈性肌萎缩症；运动神经元存活基因；线粒体聊qA；线粒体呼吸