第01章-经典实验技术(1.2).pptVIP

对于熟练操作者，左手以无齿镊子捏住心尖部，右手用眼科剪刀在心尖部剪开左心室，迅速将灌注针插入左心室直至升主动脉，用止血钳夹住灌注针，调整灌注针角度使灌注液顺利灌入，然后将右心耳剪破，放出体内血液。待右心耳流出清流液体后，即表明动物经灌注后体内已无残留血液。一般大鼠灌注200~300ml、小鼠100ml、家兔500~600ml即可达到良好的灌注效果。如需进行固定，则在灌注后继续灌注固定液，一般大鼠灌注200~300ml、小鼠100ml、家兔500~600ml即可达到良好的固定效果，此时动物的四肢、尾、颈部均已僵硬，停止灌注固定，然后即可根据需要取材。 三、脱水和透明 1．光镜切片 脱水即是将固定后的组织内水份脱掉，透明是将组织在浸蜡之前，在苯类物质中呈现出透明现象，透明的好坏直接影响浸蜡的效果。常规脱水剂为酒精，透明剂为二甲苯。脱水是为浸蜡，因为水不溶于蜡；透明是为了置换脱水剂，因为二甲苯置换究竟后可与石蜡相容。组织脱水和透明的时间应根据组织块的大小而定，在透明过程中可随时观察，直至使组织完全透明为止。对于1.5cm×1.5cm×0.2～0.3cm的组织块，一般常规梯度酒精脱水2～4h,二甲苯透明30min, 如果将酒精在温箱中加温，可适当缩短脱水的时间。 2．电镜切片 用于电镜观察的生物标本在包埋之前必须彻底脱水。目前