HOCHEST_染色.pdf

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HOCHEST_染色

Hoechst染色的讨论 Hoechst染色的具体步骤 caspase8428:我看到资料上说,荧光染色的时候可以用DAB 与荧光物质反应生成沉淀。那么, Hoechst 染色时,什么时候加DAB,浓度是多少,用什么稀释,最后怎么来终止反应?是不是还 要用抗退色固片介质来封片? sunandsuny:Hoechst 染色时无需用DAB 来显色,它直接结合细胞的DNA ,经过紫外光激发 后发出蓝色荧光。如果你是用来染培养的细胞的话,可以参考下面的步骤(切片雷同): 细胞涂片:甲醇:冰乙酸(3:1)固定15 分钟,PBS 洗一次,加Hoechest 33258 荧光染料37℃ 孵育15~30 分钟,于荧光显微镜下观察。凋亡细胞由于染色质固缩,细胞核呈致密浓染,或呈碎 块状致密浓染。操作比较容易的。 altbenair: 想做肝癌细胞 hepG2 。看过很多帖子 还有文献上的方法,但是都不太具体 大都是这样:固定(福尔马林4% ),pbs 洗三遍,加hoechst 孵育1H,将细胞悬液滴于载玻片上 荧光显微镜检测。细胞悬液怎么做?我要做贴壁细胞 用胰酶消化? drake015: . 1.贴壁细胞 ,让细胞自己在盖玻片上爬片。操作如下: A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5 分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS 或0.9%NaCl 等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培 养过夜,使约为50%-80%满。 B. 刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0.5ml 固定液,固定10 分钟或更长时间(可4℃过 夜)。 C. 去固定液,用 PBS 或0.9%NaCl 洗两遍,每次3 分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动 晃动数次。 D. 加入0.5ml Hoechst 33258 染色液,染色5 分钟。也宜用摇床,或手动晃动数次。 E. 用PBS 或0.9%NaCl 洗两遍,每次3 分钟。 F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上贴有细胞的盖玻片,尽量避免气泡。使细胞接触封 片液,切勿弄反。 G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 2. 悬浮细胞 A. 离心收集细胞样品于1.5ml 离心管内,加入0.5ml 固定液,缓缓悬起细胞,固定10 分钟或更 长时间(可4℃过夜)。 B. 离心去固定液,用PBS 或0.9%NaCl 洗两遍,每次3 分钟。洗涤期间手动晃动。 C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml 液体,再缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量 使细胞分布均匀。 D. 稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。 E. 均匀滴上0.5ml Hoechst 33258 染色液,染色5 分钟。用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。 F. 用PBS 或0.9%NaCl 洗两遍,每次3 分钟。 G. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。 H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 3. 组织切片 A. 常规包埋切片后,脱腊,透明。 B. PBS 或0.9%NaCl 洗两遍,每次3 分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。可在 六孔板中操作。 C. 加入0.5ml Hoechst 33258 染色液,染色5 分钟。也宜用摇床,或手动晃动。 D. 用PBS 或0.9%NaCl 洗两遍,每次3 分钟。 E. 将切片置于载玻片上,滴一滴抗淬灭封片液,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。 F. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 ylcui: 产品简介:碧云天生产的细胞凋亡-Hoechst 染色试剂盒为您提供了一种快速简便的细胞凋亡检 测方法。细胞发生凋亡时,染色质会固缩。所以 Hoechst 染色时,细胞核会呈致密浓染,或呈碎 块状致密浓染,参见本页照片(贴壁细胞)。 1、只需25 分钟即可完成细胞凋亡检测。 2、本试剂盒提供了固定液,染色液,及抗荧光淬灭封片液。 3、对贴壁细胞,悬浮细胞和组织切片均适用。 4、足够检测100 个样品。 包装清单: 固定液 50 ml Hoechst 33258 染色液 50 ml 抗荧光淬灭封片液 5 ml 说明书 1 份 保存条件:4 ℃保存,Hoechst 33258 染色液需4 ℃避光保

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