HOCHEST_染色.pdf

Hoechst染色的讨论 Hoechst染色的具体步骤 caspase8428：我看到资料上说，荧光染色的时候可以用DAB 与荧光物质反应生成沉淀。那么， Hoechst 染色时，什么时候加DAB，浓度是多少，用什么稀释，最后怎么来终止反应？是不是还 要用抗退色固片介质来封片？ sunandsuny：Hoechst 染色时无需用DAB 来显色，它直接结合细胞的DNA ，经过紫外光激发 后发出蓝色荧光。如果你是用来染培养的细胞的话，可以参考下面的步骤（切片雷同）： 细胞涂片：甲醇：冰乙酸（3：1）固定15 分钟，PBS 洗一次，加Hoechest 33258 荧光染料37℃ 孵育15~30 分钟，于荧光显微镜下观察。凋亡细胞由于染色质固缩，细胞核呈致密浓染，或呈碎 块状致密浓染。操作比较容易的。 altbenair: 想做肝癌细胞 hepG2 。看过很多帖子 还有文献上的方法，但是都不太具体 大都是这样：固定（福尔马林4% ），pbs 洗三遍，加hoechst 孵育1H，将细胞悬液滴于载玻片上 荧光显微镜检测。细胞悬液怎么做？我要做贴壁细胞 用胰酶消化？ drake015: . 1．贴壁细胞 ，让细胞自己在盖玻片上爬片。操作如下： A. 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5 分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS 或0.9%NaCl 等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培 养过夜，使约为50%-80%满。 B. 刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml 固定液，固定10 分钟或更长时间（可4℃过 夜）。 C. 去固定液，用 PBS 或0.9%NaCl 洗两遍，每次3 分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动 晃动数次。 D. 加入0.5ml Hoechst 33258 染色液，染色5 分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。 E. 用PBS 或0.9%NaCl 洗两遍，每次3 分钟。 F. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，尽量避免气泡。使细胞接触封 片液，切勿弄反。 G. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 2. 悬浮细胞 A. 离心收集细胞样品于1.5ml 离心管内，加入0.5ml 固定液，缓缓悬起细胞，固定10 分钟或更 长时间（可4℃过夜）。 B. 离心去固定液，用PBS 或0.9%NaCl 洗两遍，每次3 分钟。洗涤期间手动晃动。 C. 最后一次离心后吸去大部分液体保留约50ml 液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量 使细胞分布均匀。 D. 稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。 E. 均匀滴上0.5ml Hoechst 33258 染色液，染色5 分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。 F. 用PBS 或0.9%NaCl 洗两遍，每次3 分钟。 G. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。 H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 3. 组织切片 A. 常规包埋切片后，脱腊，透明。 B. PBS 或0.9%NaCl 洗两遍，每次3 分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动数次。可在 六孔板中操作。 C. 加入0.5ml Hoechst 33258 染色液，染色5 分钟。也宜用摇床，或手动晃动。 D. 用PBS 或0.9%NaCl 洗两遍，每次3 分钟。 E. 将切片置于载玻片上，滴一滴抗淬灭封片液，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。 F. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。 ylcui: 产品简介：碧云天生产的细胞凋亡－Hoechst 染色试剂盒为您提供了一种快速简便的细胞凋亡检 测方法。细胞发生凋亡时，染色质会固缩。所以 Hoechst 染色时，细胞核会呈致密浓染，或呈碎 块状致密浓染，参见本页照片（贴壁细胞）。 1、只需25 分钟即可完成细胞凋亡检测。 2、本试剂盒提供了固定液，染色液，及抗荧光淬灭封片液。 3、对贴壁细胞，悬浮细胞和组织切片均适用。 4、足够检测100 个样品。 包装清单： 固定液 50 ml Hoechst 33258 染色液 50 ml 抗荧光淬灭封片液 5 ml 说明书 1 份 保存条件：4 ℃保存，Hoechst 33258 染色液需4 ℃避光保