pMD18-T图谱.pdf

TaKaRa Code ：D103A ® pMD 18-T Simple Vector 说明书 宝生物工程(大连)有限公司 目 录 内 容 页 码 ● 制品说明 1 ● 制品内容 1 ● 保 存 1 ● 纯 度 1 ● 用 途 1 ® ● pMD 18-T Simple Vector的结构 1 ● 实验操作 2 ■ Control DNA 片段的克隆实验 2 ■ 一般DNA 片段的克隆实验 2 ■ 一种可供选择的快速克隆法 3 ● 相关说明 4 ● 使用注意 4 ● QA 5 ● 制品说明 ® pMD 18-T Simple Vector是一种高效克隆PCR产物（TA Cloning ）的专用载体。本载体由pUC18 载体改 建而成，它消除了pUC18 载体上的多克隆酶切位点，再在pUC18 载体的多克隆酶切位点处导入了EcoR V 酶切位点，使用EcoR V进行酶切反应后，再在两侧的 3‘ 端添加“T”而成。因大部分耐热性DNA聚合酶进 行PCR反应时都有在PCR 产物的3’ 末端添加一个“A”的特性 ，所以使用本制品可以大大提高PCR产物的 连接、克隆效率。 本载体尽管消除了LacZ 基因上的多克隆酶切位点，但不影响β-半乳糖苷酶的正常表达，因此，PCR 产物 克隆后仍可以利用α-互补性进行蓝白菌落的筛选，挑选阳性克隆。 由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR 产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR 扩增引物上导入合适的酶切位点。此时如果使用 PCR 扩增引物导入的酶切位点进行 DNA 酶切时，酶切 反应将不会受到T 载体上其它多克隆酶切位点上的限制酶影响，可以大大提高酶切效率，增加亚克隆成功 率。 由于本载体以 pUC18 载体为基础构建而成，所以它具有同 pUC18 载体相同的功能。此外，本制品中的 高效连接液Solution I 可以在短时间内（约30 分钟）完成连接反应，其连接液可以直接用于细菌转化， 大大方便了实验操作。本制品中的Control Insert （500 bp ）还可以用于Control 反应。 ● 制品内容 ®