第三章 高效液相色谱分析.pptVIP

* (4) 色谱柱 柱体为直型不锈钢管，标准柱子的内径为4.6 mm 或 3.9mm，柱长15～30 cm，填料一般5~10?m。发展趋势是减小填料粒度以提高柱效和减小柱径 * * (5) 检测器 a. 紫外检测器 应用最广，适用对紫外有吸收的物质， 特点： 通用性较好，对大部分有机化合物有响应； 灵敏度较高； 检测器对流动相的温度变化和流速不敏感（梯度洗提）； * * 光电二极管阵列检测器（PAD、DAD） 紫外检测器的重要进展；采用2048个二极管或更多组成阵列，得到三维色谱-光谱图。 优点: (1)可获得组分的全部光谱信息，很快定性鉴定组分； (2)可判断组分纯度。 * * b. 荧光检测器（fluorescence detector） 高灵敏度、高选择性； 利用试样具有荧光特性 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应； * * c. 示差折光检测器（通用型检测器） （ differential refractive index detector） 可连续检测参比池和样品池中溶液之间的折光指数差值，差值与浓度呈正比。 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 缺点：对温度敏感、不能用于梯度洗脱； * * §3-7 分离类型选择 choice of separation types * * §3-8 HPLC的应用 application of HPLC 1. 环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 ～50?m) 流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm?2.5mm(内径) 检测器：示差折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。 * * 2. 稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。 固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 ～100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 oC 柱 压：70 ?104 Pa 检测器：紫外检测器 * * §3-9 液相制备色谱 制备色谱：利用色谱技术分离、制备大量纯组分的有效方法。 分析HPLC 制备HPLC 目的 目的 样品组成信息 纯品回收 通常研究大部分或全部样品组分 通常只对一种或几种样品组分感兴趣 * * 1.色谱柱的柱容量（柱负荷） 分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。 制备柱允许超载（以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜） * * 2. 液相制备色谱的方法 收集组分时，通常有以下情况： （1）可获得良好分离，主峰 使用制备柱，超载提高效率(图3-28）； （2）两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。 * * 3.液相制备色谱仪 液相制备色谱仪 ：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；检测器后增加馏分收集器。 制备柱：内径20～50mm，柱长50cm。 * 有正相和反相之分 * 第三章高效液相色谱分析 High Performance Liquid Chromatography, HPLC * §3-1 高效液相色谱法的特点 高效液相色谱法： 一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。 它在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论，技术上采用了高压泵、高效分离柱、高灵敏度检测器。 * * * * 1. 高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较 高压： HPLC采用高压输液设备, 150-350*105 Pa 高速： HPLC流速大增，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需数小时。 高效：化学键和固定相, 30000塔板/米 高灵敏：10-9g （紫外检测）、10-11g （荧光检测） * * 2、HPLC与GC的区别 分