第二章蛋白质的结构与功能.ppt

1、?-螺旋  　　　　　 1、盐析法 盐 析 用高浓度的中性盐沉淀水溶液中 蛋白质的方法。 常用盐 硫酸铵、（亚）硫酸钠、氯化钠等。 盐析原理 破坏水化膜，中和电荷 分段盐析 逐步增加中性盐浓度使蛋白质 从溶液中分段析出加以分离。 如：PH=7.0时 半饱和硫酸铵可沉淀血清球蛋白， 饱和硫酸铵可以沉淀血清白蛋白。 2、有机溶剂沉淀蛋白质 机制 乙醇、甲醇、丙酮等能破坏 蛋白质的水化膜，在等电点可 使之沉淀。 关键 快速低温操作防止变性。 COO- COOH COOH P H+ P CCl3COO- P NH3+ NH3+ NH3+-OOCCl3C 3、有机酸沉淀蛋白质 苦味酸、钨酸、鞣酸及三氯醋酸等酸性物质可与蛋白质正离子结合成不溶性的蛋白盐沉淀。条件：pHpI 如用三氯醋酸制备无蛋白血滤液 条件：pH pI NH3+ NH2 NH2 P OH- P Ag P COO- COO- COOAg 4、重金属盐沉淀蛋白质 重金属离子如汞、铅、铜、银等可与 蛋白质负离子结合形成蛋白盐沉淀。 应用： 重金属盐中毒，口服大量乳品、蛋清并催吐。 超速离心法 不同蛋白质大小、形状不同，在一定的离心力场作用下沉降速率不同，可用于分离蛋白质和测定其分子量。 （三）透析、超滤与超离心技术可用于 分离蛋白质 超滤 是利用超滤膜在一定压力下使大分子蛋白质滞留，而小分子物质和溶剂滤过。 透析 将混杂有低分子物质的蛋白质溶液放于半透膜透析袋内，除去低分子杂质，以达到纯化蛋白质的目的。 2、?-折叠（?-片层） 结构特点 ① 多肽链相邻肽键平面折叠成锯齿状，夹角为110?。 ② 可由一条肽链折返而成，或由2条以上肽链平行排列而成。 ③ 相邻肽链形成氢键，并与长轴垂直。 ④ R基团交错伸向锯齿上下。 3、? -转角 球状蛋白分子中，多肽链常出现的180℃回折。 结构特点： ① 由四个连续的氨基酸残 基组成。第一个氨基酸 残基的CO与第四个氨基 酸残基的NH形成氢键， 以稳定转折的构象。 ② 脯氨酸常出现在转角中。 4、无规卷曲 除以上几种比较规则的构象外，其余没有确定规律性的肽链的构象 。 无规卷曲 四、多肽链所有氨基酸残基相对空间 位置是蛋白质的三级结构 是指整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置，包含主链和侧链构象的全部内容。 肌红蛋白 蛋白质的三级结构（tertiary structure） 长度缩短 表面亲水 形成特定区域 氢键 离子键 疏水键(最重要) 范德华引力 二硫键 （一）多种化学键参与维持蛋白质 三级结构构象 三级结构主要靠侧链基团间的次级键维持稳定 （二）介于二、三级结构之间的模体和结构域是蛋白质发挥生物活性和特殊功能的必需基本结构 模体（motif） 是指在多肽链内，顺序邻近的两个或三个二级结构肽段，在空间靠近形成特殊的空间构象，发挥特殊的功能。 ?螺旋-环- ?螺旋 （helix-loop-helix） 锌指结构（zinc finger） 钙结合蛋白 DNA结合蛋白 结构域(domain) 分子量较大的蛋白质多肽链中，常由数百个氨基酸残基折叠成1个或数个球形结构单位，各自行使功能，称为结构域。结构域自身紧密，相互间联系松弛。 五、含有两条（或两条以上）多 肽链的蛋白质具有四级结构 亚基（subunit） 在蛋白质四级结构中，每一条独立具有三级结构的多肽链称为亚基。 蛋白质四级结构（quaternary structure） 由两条或两条以上具有三级结构的多肽链通过非共价键相互缔合而成的蛋白质空间构象。 亚基可相同，也可不同。 次级键： 氢键 离子键 疏水键（主要）