干旱胁迫对小麦生理生化指标的影响.docVIP

2013-2014学年上学期 植物生理学实验科技论文 　 题　　目　干旱胁迫对小麦　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　生理生化指标的影响　　　　　　　　 姓　　名　　曾克英　　　　　　　　　　　 学　　号　　114120243　　　　　　　　　　　 院、　系　生命科学院学院　　　　　　　　　　　 专　　业　应用生物教育（A）班　　　　　　　　　　　　 二0一三年六月 干旱胁迫对小麦生理生化指标的影响 摘要 本实验选用小麦种子作为实验材料， 测定其抗旱指标并对其抗旱性评估， 所有抗旱指标均采用紫外分光光度计测定其在细胞内的含量；实验结果表明， 聚乙二醇模拟干旱对小麦幼苗 脯氨酸、可溶性糖和丙二醛过氧化氢、抗氧化酶系统、 谷胱甘肽、ASA 含量均明显增加， 表现出不同程度的抗旱效应。 关键词： 小麦； 干旱胁迫； 发芽率； 生理生化指标 Abstract: Keywords: wheat； drought stress；germination rate； physiological and biochemical index 1 材料与方法1.1实验材料的选取和培养 1.2干旱胁迫处理 把上述小麦幼苗分成实验组和对照组， 将实验组用PEG溶液浇灌处理； 对照组小麦苗仍然用蒸馏水浇灌继续培养。 处理结束后， 把小麦幼苗转移到26℃下恢复培养7天， 每天光照12h， 观察对比实验组和对照组小麦苗生长差异变化情况。 1.3测定抗逆指标含量 1.3.测定抗逆指标脯氨酸（Pro）的含量 运用紫外分光光度法测定。 提取： 分别取0.1 g实验组和对照组的小麦胚芽鞘， 加入3 mL 3%磺基水杨酸（SSA）和少许石英砂， 充分研磨后用2 mL 3% SSA冲洗研钵， 用离心机5000 rpm离心10 min ， 取其上清液。 测定： 取上清液各2 mL， 分别加入2 mL冰乙酸和2 mL茚三酮试剂， 水浴煮沸15 min， 冷却后再5000 rpm离心10 min（若没沉淀可略此步骤， 分别测定A520。 1.3.测定抗逆指标可溶性糖和丙二醛（MDA）的含量 运用紫外分光光度法测定。 提取： 分别取0.1 g实验组和对照组小麦苗， 加入3 mL 10%TCA和少许石英砂， 充分研磨后用2 mL 10%TCA洗研钵， 5000 rpm离心10 min， 取其上清液。 测定： 分别取上清液各mL， 加入0.6%TBA（用10%TCA配制） mL， 水浴煮沸1 min， 冷却后用离心机5000 rpm离心5 min （视沉淀有无）， 分别测定OD450和OD532。 OD450=C185.4 OD532=C17.4+15500C2 求解方程得： C1/(mmol/L)=11.71OD450 C2/(umol/L)=6.45OD532 - 0.56OD450 公式中C1为可溶性糖的浓度； C2为MDA浓度。 1.3.测定抗逆指标H2O2的含量 运用紫外分光光度法测定。 提取： 分别取0.1 g实验组和对照组， 加入3mL 和少许石英砂， 充分研磨后用2mL 洗研钵， 用离心机5000 rpm离心10 mi， 取其上清。 测定： 分别取上清液各mL， 加入0.1%Ti(SO4)2 [用20%(v/v) H2SO4配制] mL， 摇匀， 用离心机 5000 rpm离心10 min ， 测定OD410。 1.3.测定抗逆指标抗氧化酶(POD)的含量 运用紫外分光光度法测定。 提取： 分别取对照组和实验组小麦苗0.1 g作为实验材料，加入少许石英砂和3 ml提取液（50mmol/L PBS, pH6.0,内含0.１mmol/ LEDTA, 1%PVP）， 充分研磨后完全转入离心管中， 再用2 ml提取液洗研钵， 5000 rpm离心10 min ， 上清液 ， 用于测定POD和PPO酶活性。 　 POD测定： 取POD反应混合液（10　mmol/L愈创木酚， 5 mmol/L H2O2,用PBS溶解）2.95 ml， 加入酶液50 ml（空白调零用PBS取代）， 立即记时， 摇匀， 读出反应2 min时的A470。 PPO测定： 取PPO反应混合液（ 20 mmol/L邻苯二酚， 用PBS溶解）2.9 ml， 加入酶液0.1 ml（空白调零用PBS取代）， 立即记时， 摇匀， 读出反应 2 min时的A410。 以每分钟A值变化0.01所需要的酶液的量为一个活力单位（U）， 则： 1.3.测定抗逆指标GSH的含量 运用紫外分光光度法测定。 提取： 分别取0.1 g实验组和对照组的胚芽鞘， 加入3mL