毛细管电泳定量分析植物激素.pdfVIP

第27卷 研究简报 第6期 分析化学(删HuAxuE) of 704～707 1999年6月 ClliI坨seJo啊1al mIal徊calC11eIllistry 毛细管电泳定量分析植物激素 郑 冰杨海新 何金兰+ (湛江师范学院化学系，湛江524048) 摘要详细研究了三种重要植物激素：生长素吲哚．3．乙酸、吲哚．3．丁酸、赤霉素GA3、G～ 及激动素6-苄氨基瞟呤的毛细管电泳分离条件；10IIlin内完成上述5组分分离；分离效率为5 ×1驴一2．6×1驴；5组分检出限为4．5—18 n珂L；迁移时间与峰高定量精度分别低于1．2％和 2．4％。方法已用于香蕉叶中激素的测定。 关键词 毛细管电泳，植物激素，香蕉叶 1 引 言 植物激素的分析是当前生物化学研究热点‘¨，常用的Gc—Ms[利、唧Lc[33及免疫分析‘4’均繁 杂费时，样品用量大且不能同时进行多种激素分析。毛细管电泳已用植物生长素的分析【5]，但 同时定量分析多种植物激素尚未见报道。本文研究了毛细管电泳同时分析植物组织中3种重 与峰高定量精度分别在1．2％和2．4％以内。方法成功地用于香蕉叶中激素的测定。 2实验部分 2．1仪器与试剂 1229型高效毛细管电泳仪及uV一214m检测器(北京新技术应用研究所)；未涂层熔硅毛 细管50．5cm(有效长度35cm)，内径50脚(河北永年光纤厂)；x—Y记录仪(四川仪表厂)。 赤霉素G如，G凡标准为Si靴公司产品，其它标准与试剂均为国产生化试剂或分析纯试 剂。实验用水为石英亚沸蒸馏水。 2．2试样处理 准确称取洗净风干或70～80℃下烘3h后磨细的香蕉叶5．O mL，1mol／L盐酸 g，加甲醇40 5．O n1L，用l mL低温浸泡过夜。离心(7000r／nlin)15幽，取上清液。遮光下减压浓缩至20 脚l／L 2。3后加乙酸乙酯30rIlL、混匀、静置、待分层清晰。水相中含激动素 HCl调至pH nlLO．1瑚l／L 6BAP，将水相减压蒸馏至干，贮存待测。酯相中含赤霉素与生长素，将酯相与30 2。3后用乙酸乙酯萃取，再取酯相减压蒸馏 NaHc03混匀、静置、分层后取水相，再次调至pH 至干，贮存待测。 2．3操作过程 阳极端手动压差进样，高度10咖；时间20s；分离电压22kV。溶液进入毛细管之前，均用 H洲L lTlin。 0．22舯微孔滤膜过滤。每次进样前依次用O．1 NaOH、水及缓冲溶液各冲洗1～2 1998J08—25收稿；1999-01．24接受 万方数据万方数据 第7期 郑冰等：毛细管电泳定量分析植物激素 705 分离进行5—6次后，更换两边缓冲溶液。 3结果与讨论 3．1 sI)s效应 5组分均具有不同程度的亲水性。分离采用自由溶液电泳和胶束电动毛细管色谱 sDs时，G如与G气呈现三角峰。而SDS为2．5mol，L，G如与G丸峰形锐但两者分不开。 3．2乙醇与葡萄糖的效应 乙醇是