梅山与杜洛克母猪发情前期卵巢组织差异表达基因的分离研究.pdfVIP

摘 要 猪的繁殖力是影响养猪业生产效益的主要因素，对猪产仔数性状的选育和改良是猪 育种工作的主要目标之一。由于猪排卵及繁殖性状是由多基因控制的数量性状且遗传力 很低(h2≤0.15) ，因此很难通过常规育种技术取得进一步提高。分子生物学技术在育种选 择中具有常规育种技术所不可比拟的优势，但因目前影响猪排卵及繁殖性状的分子机理 还不够系统、全面，这在很大程度上限制了分子生物学技术在育种选择中的应用。 本研究利用 DDRT-PCR 的技术从基因转录水平研究发情前期梅山与杜洛克母猪卵巢 之间差异表达的基因，分离差异表达基因，为深入研究影响猪排卵数的分子机理调控网 络打下基础。主要研究结果如下：试验选取同一胎次发情正常繁殖表现符合品种特征的 梅山猪和杜格克母猪各 3 头取其卵巢，提取总 RNA ，组成两个总 RNA 池。采用 9 条锚 定引物，10 条随机引物组成 90 种引物组合进行 DDRT-PCR ，共获得 13 条差异表达条带， 通过 NCBI 比对发现其中 5 条序列与已知基因高度同源，分别命名为 EST511(216bp) ， EST141(495bp) ，EST142 (104 bp) ，EST64(202bp) ，EST33(244bp) 。EST511 与谷氨酸半 胱氨酸连接酶有较强的同源性，同源性为 88 ％。EST141 与猪 ADP-ribosylation factor 3 (ARF3) gene 高度同源，同源性为 99 ％。EST142 与猪 BCL2/adenovirus E1B 19kDa interacting protein 3-like (BNIP3L)序列同源，同源性为 97 ％。EST64 与超氧化物歧化酶 Orgotein (Superoxide Dismutase, SOD) ,有较强的同源性，同源性为 99% 。EST33 与猪的骨 形成蛋白和激活素的跨膜抑制剂高度同源，同源性为 100%。其他序列在数据库中均未发 现同源基因。 通过半定量 RT-PCR 验证 EST 在猪种间的表达差异，并分析这些差异表达 EST 在梅 山猪心、肝、肺、肾、肌肉、脂肪、小肠、大脑、卵巢、子宫、脾、输卵管等各个组织 中的表达情况，结果表明：各个 EST 在两猪种卵巢间均为差异表达。EST511 在肾和小 肠中微量表达，在心、肝、肺和大脑中检测不到表达，在其他组织中表达。EST141 在肾 中中等表达，在输卵管，子宫，脾中少量表达，在心、肝、肌肉、脂肪、大脑中检测不 到表达。EST142 在肾、肌肉、脂肪、大脑、脾、子宫、输卵管中中等表达，在心、肝中 微量表达，在肺和小肠中几乎检测不到表达。EST64 在肾、子宫、大脑、脾表达丰富， 在肌肉，脂肪中少量表达，在心、肝、肺、小肠、输卵管中几乎检测不到表达。EST33 在肌肉中微量表达，在大脑、肾和肺中几乎检测不到表达，在其他组织中都表达。 关键词：梅山；杜洛克；发情前期；差异显示 PCR ；卵巢 I Abstract The fecundity of pig is a main factor of porcine production efficiency, litter size of pig is one of the main breeding objectives.Since ovulation and reproductive traits of pig is controlled by multiple genes and the heritability of quantity traits is very low (h2 ≤ 0.15), it is difficult to obtain to further improvement by using conventional breeding techniques. Compared with conventional breeding techniques, molecular biology technology shows incompara