近红外荧光探针尿白蛋白对肾疾病的警告.docxVIP

一种检测尿白蛋白的近红外荧光探针及对肾疾病的警告摘要肾脏的疾病，包括急性肾损伤、肾病综合征、慢性肾脏疾病，肾囊肿，伴有一系列的临床特点，人血清白蛋白（HSA）是其中肾脏疾病早期预警的重要标志。据我们所知，虽然有报道在血浆中高浓度的HSA的一些HSA荧光探针，多数不能达到低浓度的尿白蛋白的检测灵敏度。在这项工作中，报告了基于TICT机制NIR荧光探针NIR -HSA，它可以用在8.83-fold荧光增强液检测，快速反应（完成5 s内）、高灵敏度（DL 26.16 nm），和优良的稳定性。人尿中检测，近红外HSA显示完美的恢复特性，以及良好的应用潜力检测痕量HSA对危重疾病的警告。1.引言人血清白蛋白（HSA）是已知的在多种生理和病理过程中起到至关重要的作用。通常，HSA功能作为一个无所不在的运输者去传送激素、脂肪酸、药物及其代谢产物和维持血浆胶体渗透压。一般来说，它是产生于肝脏的N-末端肽前白蛋白原。经过一系列从粗糙内质网到高尔基体的加工后，它迅速分泌进入门脉循环。开创性的研究表明血清白蛋白具有三维结构组成的几个结合口袋由于多达67%的二级结构的形成通过六转α螺旋。有两个主要的结构选择性结合位点位于HSA的子域IIa和IIIa，点I和点II。当肾脏工作时，有可能是低于30毫克/升的尿液中白蛋白，在血清中的白蛋白含量的参考范围大约是35-50 g/L。但是，越来越多的证据显示，肾损伤后尿中大量的白蛋白渗漏到尿中（例如肾小球滤过功能损伤），它不仅能攻击体液渗透压，而且还与严重疾病有关，例如慢性肾脏疾病，急性肾损伤，肾病综合征，及蛋白丢失性肠病。作为危重病早期预警的重要标志物。虽然很多以前的研究工作是关于HSA的生理功能，在体液中的作用和痕量识别的准确的分子机制还没有克服。因此，充分了解HSA的化学生物学，开发具有复杂生物样品的检测限低的HSA监测准确有效的方法是迫切需要的，尤其是尿，这对生物学研究的重要以及临床诊断是至关重要的。至目前为止，有几种方法来检测体外或体内的血清白蛋白，包括液相色谱-质谱/质谱（LC-MS/MS）的基础上的蛋白质组学技术，放射免疫测定方法一般临床实验室，电化学和荧光技术分析。在这些技术中，染料结合技术由于操作简单，选择性高，灵敏度高，具有良好的高空间分辨率和时间分辨率，尤其是非破坏性的特点引起了特别的关注。近年来，已经开发了几种荧光探针在体外或体内的血清白蛋白的检测。不幸的是，我们发现，大多数的报告的探针有相当短的激发波长（小于500纳米），发射波长（小于600纳米）和差的检测限（ 30毫克/升），伴随着负面影响，如光漂白，和自体荧光干扰，严重限制了其在复杂的体液检测微量白蛋白的生物应用。此外，大多数探针需要改进热稳定性在长途运输承受高温。因此，它启发我们开发一个近红外（ 650 nm）具有高选择性，灵敏度的荧光探针，HSA的生物样品中识别稳定性和极低的检测限。在我们以前的工作中，通过引入共轭乙烯基增加其发射波长在近红外区域，我们设计并合成了一系列采用基于扭曲的分子内电荷转移（TICT）机制的分子转子的荧光探针，在体外和体内，表现出特定的血清白蛋白检测的近红外光谱发射。由上述的研究，在这项工作中，我们使用半菁染料合成了一种近红外荧光探针NIR-HSA，如图1所示。菁/半菁是一个通过对生色团骨干延伸次亚乙烯基部分的在近红外区长波发射的特色生色团。当NIR-HSA加入HSA的混合系统，通过超快限制扭曲的分子内电荷转移（TICT）得到了近红外（NIR）荧光发射，具有较大的斯托克斯位移（△λ=165 nm）和在发射680 nm左右8.83-fold增强。位移实验分析清楚地表明，对HSA的NIR -HSA的结合位点I。重要的是，对HSA的检测限（3σ/ K）被计算为26.16纳米（1.73毫克/升），这是优于大多数报道的荧光探针。这个探针表现出良好的热稳定性在PBS缓冲(0.01 M,pH值7.4)60摄氏度。在107.23-108.79 %范围内得到的RSD为0.09%-1%的良好的回收率，清楚地表明，探针NIR-HSA可以用来检测HSA纯尿液浓度且无干扰。实验部分2.1 基本信息与材料2.2 检测限的确定检测限（DL）的计算是基于NIR-HSA的近红外荧光滴定的，在HSA存在（0-1.0μM）。NIR-HSA的荧光强度是测量三次测量和得到了空白实验的标准偏差。利用检测限计算了检测限，用以下公式计算：DL=3σ/ Kσ是空白测量的标准偏差，k是近红外荧光发射强度（F695 nm）与HSA不同浓度之间的斜率2.3 量子产率的确定2.4 NIR-HSA探针在PBS缓冲液中（0.01 M，pH 7.4）的溶解度为了探索探针NIR- HSA的溶解度，在最大吸收uv-vis吸光度采用通过安捷伦科技卡里60 uv-vis分光光