发酵工程讲课-培训课件.ppt

通过筛选高产细胞系，改进培养条件和技术，设计适合植物培养细胞的发酵罐等手段，对烟草、紫草、长春花、丹参、红豆杉、三尖杉、洋地黄、人参、三七、西洋参、毛地黄、茜草、黄连和彩叶紫苏的多种植物细胞进行了大规模悬浮培养的试验，以生产烟碱、紫草宁、长春藤碱、丹参酮、紫杉醇、三尖杉酯碱、洋地黄碱、人参皂、毛地黄碱、茜草素、黄连素和紫苏素等药物.发酵罐规模已达到(10～75)?L，其中紫草宁、茜草素和人参皂已商业化.近年来，紫杉醇含量已经比原植物提高了100多倍，达到153?mg/L。 2.2　遗传转化器官的培养与药物生产 由农杆菌感染植物组织形成的“畸形芽”和“毛状根”是继细胞培养后又一重要培养系统。中药许多有效成分的形成与器官分化过程密切相关，而在培养细胞中有效成分不存在或含量极少.与细胞培养相比，毛状根培养有明显优点：生长速度快、分枝多，弱向地性；毛状根处于器官化水平，其生理生化、遗传特性稳定，具有稳定的次生代谢物合成能力，毛状根培养系统对根类中药材中有效成分的生产更为重要。 ?毛状根(hairy?roots)是发根农杆菌（Agrobacterium?rhizogenes）感染双子叶植物后，其Ri质粒上的T—DNA片断整合进植物细胞核基因组中诱导产生的一种特殊表现型，近10年来已发展成一种新的培养系统。  上海中医药大学对黄芪毛状根的大规模培养技术和化学成分与药理活性进行了深入研究，在3?L、5?L、10?L培养器中经21d培养，有效成分产量可达10?g/L (干重)，而且黄芪毛状根中皂甙、黄酮、多糖、氨基酸等含量近似于药用黄芪，其作用效价也与药用黄芪基本一致。 我国从黄花蒿中分离鉴定出的青蒿素是抗疟有效单体，对脑型和抗氯喹性疟疾有特效，成为WHO推荐产品.刘春朝等利用Ri1601质粒转化青蒿叶片筛选的高产系，进行了青蒿毛状根合成青蒿素的培养工艺条件研究，取得较好结果：在优化条件下，经25?d培养，青蒿素产量达223.3?mg/L。目前毛状根培养系统的中试装置已达500?L的规模，利用20?t发酵罐生产的人参毛状根已开发成商品投入市场 。 2.3　药用植物组织的离体培养 自1960年利用组织培养技术将兰花茎尖分生组织进行离体培养，建立无性繁殖系并诱导分化成植株以来，已发现能进行离体分化的植物有千余种，能进行快速繁殖的有数百种，能进行规模化和商品化生产的有近百种.其中有100多种药用植物经离体培养分化成植株，对稀有珍贵中药品种的保存、繁育和纯化具有重要意义。 甜菊茎500?L大规模培养结果表明，在25?℃、2000?lux光照、15?L/min通气量的培养条件下，每批培养小植物数量可达20万株。 通过不断过筛、密度梯度离心以及培养的方法基本上解决了胡萝卜体细胞胚胎同步发育的难题，实现了从单细胞到完整植物发育的同步化，为胡萝卜素的生产开辟新途径。 最近进行的从生物反应器中培养青蒿小植物生产萜类化合物的尝试，为传统中药的大规模培养提供了先例。 2.4　生物转化系统与药物生产 植物培养细胞和微生物具有诸如酯化、氧化、乙酰化、还原化、甲基化、羟基化和羰基化等多种生物转化能力。生物转化实质上是一种酶催化反应。某些植物酶能够催化微生物和化学合成很难进行的立体专一和区域专一的反应，因此进行自由悬浮或固定化细胞的生物转化研究就成为植物生物技术的一个重要研究领域 。 熊果苷是人类皮肤中黑色素合成的抑制剂，是美容产品的重要添加剂.利用毛曼陀罗、长春花或蛇根木的培养细胞进行的生物转化取得了成功，其产量分别达到7.1?g/L、9.2?g/L和18?g/L，已经达到化学合成的产量，有希望进行商业化生产。最近将鬼臼毒转化成它的β-葡萄糖甙也获得成功，转化率达到294?mg/L。 抗体工程 发酵工程在医药研究和生产中的应用 ?1　微生物发酵工程与医药 1.1　抗生素的微生物合成 抗生素原指微生物产生的、能在低浓度杀死或抑制细菌或真菌等微生物的物质，也包括天然产生的抗生素经化学方法改造所得的半合成抗生素，并且将能抑制肿瘤、原虫等微生物产物也归入抗生素类。抗生素的化学结构种类繁多，主要有糖类、肽类、蛋白质类、核苷类、多烯类、多醚类、内酰胺类、大环内酯类、四环类、安莎类等。抗生素主要用于治疗微生物感染和抗癌。 目前，已找到的抗生素有数千种，其中具有临床效果并已利用发酵法大量生产和广泛应用的多达百余种。在已发现的抗生素中，由真菌产生的约占13％，由地衣产生的在1％以下,由细菌产生的约占12％，由放线菌产生的约占67％。在放线菌所产生的抗生素中，约90％是由链霉菌产生的。 临床主要应用的抗生素 头孢菌素类抗生素 已发展到第四代，主要研究动向是提高抗革兰阳性菌、铜绿假单胞菌和厌氧菌活性。对金葡菌等革兰阳性球菌的作用强于第三代，对头孢菌素酶（Amp