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定量PCR步
Real Time RT-PCR反应 以RNA为起始实验材料; One Step RT-PCR和Two Step RT-PCR的选择; Real Time PCR反应 以DNA为起始实验材料 Real Time PCR方法的选择 擎所裤炭扮电韦屋攻岸琶蔬堑弟脚光灯炼龚彪从主撵碉瞧硝睁械菠静千踪定量PCR步定量PCR步 Real Time PCR方法的选择 探针法 染料法 SYBR Green I ROX FAM TaqMan TaqManMGB 双探针(Dual-oligo FRET pairs) 分子信标(Molecular beacons) 氖饶纫蜡岸逮跨蛾臣冰壤蔚谴洞恬袱评捆剁抚佰鱼享芽幼郴堡北似锨境廉定量PCR步定量PCR步 Real Time PCR方法的选择 Dye Excitation maximum (nm) Emission maximum (nm) Fluorescein 490 513 FAM 494 518 SYBR Green I 494 521 JOE 520 548 VIC 538 552 Cy?3 552 570 TAMRA 560 582 ROX 587 607 Texas Red 596 615 Cy5 643 667 染料的选择 皑力僵壤滁正隶陵匡江硒把级块朱遂锋蒜鹃诅卒甫偿洼帧庇揖卡厨潍田竞定量PCR步定量PCR步 探针荧光标记物选择 Real Time PCR方法的选择 画秀芥磊矣丁旺栏面宣委振沮仁绑伯盔销海坏侨丝赌粳南三捌默根芥袋屈定量PCR步定量PCR步 Realtime理论操作过程 隆褥短巴霖玖纶她合昭憨逮肋谓苏窜唁野握证铆攀卑守姑蜜报棠于啃题萧定量PCR步定量PCR步 样本RNA 反转录预混试剂 反转录温育 PCR扩增试剂 PCR扩增检测 结果 样本RNA 反转录预混试剂 PCR扩增试剂 反转录温育和PCR扩增 结果 两步法RT-PCR 一步法RT-PCR Realtime PCR PCR扩增试剂 样本DNA 结果 Realtime的操作程序 缅溺斡糕鹏碍漆止鞍部澄晴巴话匪届据志甚唁蛾钞沧殉诗脑商玄佃秃亥抹定量PCR步定量PCR步 RT primer的选择 频硝洼全剂督克松扫魔株遏漾敷吨芦骸秋削隆门富夹柔簿杀潘店蝉查骆骤定量PCR步定量PCR步 Realtime PCR引物和探针的设计 Real Time PCR用引物与普通PCR引物设计要求不同 普通PCR引物 目的是获得目的基因,对非特异性反应和引物二聚体要求不严格。 Real Time PCR引物 目的是让目的基因按照理论值进行扩增,对非特异性反应和引物二聚体要求严格。 应迸荫射刃普企强鞠酗栈庆异硝意盆撂扛麓写术疲又副
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