基于纳米复合材料应用.docx

摘要目的药物敏感性试验简称药敏试验，旨在了解病原微生物对各种抗生素的敏感程度，指导临床合理选用抗生素的种类和用量，以做到利用药物对疾病进行更加准确的治疗。由于在实践操作中所进行的各种标准药敏试验的周期较长，一般需要耗用几十个小时，且操作过程较复杂，需要有经验的专业实验人员进行反复验证。因此，建立灵敏、快速和操作简单的药物敏感性试验方法在科研应用方面具有非常重要的意义。本研究以普鲁士蓝(PB)为光学探针，大肠埃希氏菌(E. coli)为模型微生物所构建一种新型的光学体外药敏试验方法，用于快速的检测出药物有效性及筛选出抗菌新化合物，弥补现有的方法缺陷。方法实验以K3[Fe(CN)6]为电子受体，定量转移微生物呼吸作用所产生的电子，自身被还原为K4[Fe(CN)6]，与后续加入的FeCl3反应生成普鲁士蓝(PB)。当微生物的活性受到抑制时，其呼吸作用会减弱，相应生成的PB的量也会减少。因此，可通过700nm处测定PB的吸光度确定受试微生物活性变化。通过考察[Fe(CN)6]4-的生成量，确定体系的稀释倍数和FeCl3的加入量；通过考察吸光度值与E. coli固定时间的关系，确定氧化石墨烯(GO)固定E. coli的最佳时间；通过比较固定化E. coli在Luria-Bertani(LB)培养基和磷酸缓冲溶液中活性随存储时间的变化趋势，确定最佳存储条件；根据吸光度值的变化，将最优条件下制备的GO固定E. coli颗粒用于检测阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星、万古霉素、头孢噻肟钠5种抗生素的有效性。结果4h培养时间内，45 mmol/LK3[Fe(CN)6]足够用于转移微生物呼吸作用产生的电子，但生成的K4[Fe(CN)6]量过多，导致生成的PB沉淀，因此应在加入FeCl3之前，将培养液稀释至5 mmol/L。当固定时间为16 h时，以具有表面GO结构的石墨颗粒为载体的E. coli固定效果最好。培养相同的时间，在PBS中保存的GO固定E. coli的吸光度值比其在培养基中保存时的吸光度值小。以GO固定E. coli为受体的光学方法进行药物的有效性检测中，抗生素对菌体活性的影响与接触时间和抗生素种类相关。阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星和头孢噻肟钠均可对E. coli产生明显抑制作用；相比之下，万古霉素的作用较弱。结论与一般的药物有效性检测方法不同，在优化条件下的基于GO固定E. coli的PB光学检测方法更加简便、快捷、低耗、价廉，同时具有较好的灵敏度。所以，该方法在抗菌类药物的检测和临床诊断方面具有一定的应用潜力。关键词：药敏实验；普鲁士蓝；光学方法；抗生素；药物有效性ABSTRACTObjective The drug susceptibility test referred to as the drug sensitivity test, which is designed to understand the sensitivity of pathogenic microorganism to various antibiotics in order to guide clinical rational selection of the types and dosage of antibiotics. So the drug susceptibility test ensures a more accurate use of drug to treat the objective disease. However, the testing cycle of various standard drug susceptibility tests are so long, even spending dozens of hours. Otherwise, the standard drug susceptibility test is often needing complex operations and professionals to repeatedly verify the accuracy of the test results. Therefore, establishment of a rapid, sensitive and simple drug susceptibility test is of great significant in scientific research and application. .This study applies a common dye - Prussian blue (PB) as a optical probe and Escherichia coli (E. coli) a