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标题：尿液蛋白测定 版本号：A 修订号：0 文件编号：HRYY-SOP-LJ-04 发布日期：2010年06月06日 生效日期：2010年07月01日 发布部门：管理层 编制人：张丽君 审核人：张丽君 批准人：钱晓伟 页码：第1 页 ， 共 5 页 尿液蛋白定性试验 1 检验目的 正常情况下，肾小球滤过膜的孔径屏障及电荷屏障使只有相对分子质量低于70000、主要带正电荷的蛋白质可滤入原尿中，而近端肾小管通过胞饮作用可重吸收原尿中的蛋白质。由于蛋白质的肾小管最大重吸收率极低，一旦肾小球滤过增高或肾小管分泌增多，就使肾小管蛋白质重吸收达到饱和，从而形成蛋白尿。因此检查尿液蛋白含量变化对肾脏疾病的诊断，观察疾病的变化及治疗效果具有重要参考价值。 2 检测原理 尿液蛋白定性测定方法主要有干化学法、加热醋酸法和磺基水杨酸法。 干化学法测定尿液蛋白的原理是在一定的条件下(pH为3.2时)，溴酚蓝产生出阴离子，与带阳离子的蛋白质(主要是白蛋白)结合发生颜色变化。 加热醋酸法测定尿液蛋白的原理是加热煮沸可使蛋白质凝固变性，加酸使尿pH接近蛋白质等电点(pH5左右)时，有利于变性蛋白质的沉淀。 磺基水杨酸法测定尿液蛋白的原理是磺基水杨酸是一种生物碱试剂，在略低于蛋白质等电点的酸性环境下，其磺柳酸根阴离子可与蛋白质的氨基酸残端阳离子相结合，成为不溶性的蛋白盐而沉淀。 3 标本 3.1 收集患者清晨新鲜尿液10ml。 3.2 标本采集后应立即送到临床检验科体液检验室。 3.3 不能及时测定的标本应于2℃～8℃冰箱保存。 4 设备和试剂 4.1 干化学法：罗氏公司的Miditron JuniorⅡ尿液分析仪(主机号：8102061)及专用试带。 4.2 加热醋酸法：5%醋酸溶液；50%醋酸溶液；饱和氯化钠溶液。 4.3 磺基水杨酸法：100g/L磺基水杨酸乙醇溶液：取磺基水杨酸20g，加水至100ml，取此溶液与等量95%乙醇或甲醇液混合。 标题：尿液蛋白测定 版本号：A 修订号：0 文件编号：HRYY-SOP-LJ-04 发布日期：2010年06月06日 生效日期：2010年07月01日 发布部门：管理层 编制人：张丽君 审核人：张丽君 批准人：钱晓伟 页码：第2 页 ， 共 5 页 5 干化学法的校准步骤 5.1 Miditron JuniorⅡ尿液分析仪每1月对仪器进行校准一次。 5.2 仪器校准的操作步骤，详见Miditron JuniorⅡ尿液分析仪仪器登记文件。 6 操作步骤 6.1 干化学法操作步骤 样本的准备：将编好号的样品放在仪器相应的标本位置； 试剂的检查：仪器开机后，检查各种试剂的位置、体积、批号等，确认无误后方可进行测定；操作方法：测定样本项目必须在仪器校准通过的情况下进行，其操作过程操作步骤详见Miditron JuniorⅡ尿液分析仪仪器登记文件。 6.2 加热醋酸法操作步骤 取15×150mm试管一支，加尿液约8毫升到试管2/3处，用手指(或试管夹)捏住试管底部，将试管口向上斜置在火焰上，使火焰直接在尿液斜面下约1～2公分处加热，煮沸；轻轻直立试管，在黑色背景下观察煮沸部分有无白色混浊；滴加5％醋酸溶液3～4滴，再煮沸后，立即观察结果。若尿液有蛋白则加酸后仍显混浊，若为盐类，加酸后即变清亮；结果判断：阴性(-，无蛋白)：清亮无混浊；微量(±，10mg/dl以下)：仅于黑色背景时可见白色混浊；弱阳性(+，10～50mg/dl)：白色轻度混浊无颗粒及絮状沉淀；阳性(2+，50～200mg/dl)：明显白色混浊有颗粒但无絮状沉淀；强阳性(3+，200～500mg/dl)：大量絮片状混浊一般不见凝固块出现；极强阳性(4+，500mg/dl以上)：煮沸后凝固成块状有大量絮片状沉淀。 6.3 磺基水杨酸法操作步骤 1 试管法：取小试管2支，各加清晰弱酸性尿液3～5毫升，于一试管内加100g/L磺柳酸溶液3～4滴，轻轻混匀，1分钟后观察结果。另一试管不加试剂作对照。 2 凹玻片法：在凹玻片的两个凹孔内，各加清晰尿液3～5滴(约0.2毫升)，于一凹孔内滴加100g/L磺柳酸溶液1滴，于另一凹孔内不加试剂作对照，在黑色背景下，1分钟后观察结果。 3 结果判断：阴性(-)：不显混浊，尿液外观仍清晰透明；微量(±)：可见轻微混浊，隐约可见；弱阳性(+)：明显白色混浊，但无颗粒出现；阳性(2+)：稀簿乳样混浊出现颗粒；强阳性(3+)：乳浊， 标题：尿液蛋白测定 版本号：A 修订号：0 文件编号：HRYY-SOP-LJ-04 发布日期：2010年06月06日 生效日期：2010年07月01日 发布部门：管理层 编制人：张丽君 审核人：张丽君 批准人：钱晓伟 页码：第3 页 ， 共 5 页 有絮片状沉淀；极强阳性