03-1_酶的热力学和动力学_酶.ppt

公元前两千多年，我国已有酿酒记载。 一百余年前，Pasteur认为发酵是酵母细胞生命活动的结果。 1878年，Kühne首次提出Enzyme一词。 1897年，Eduard Buchner用不含细胞的酵母提取液，实现了发酵（获得1907年的诺贝尔化学奖）。 1926年，Sumner首次从刀豆中提纯出脲酶结晶 (deoxyribozyme)，证明了尿素酶的蛋白质本质（获得1946年度诺贝尔化学奖）。 In 1965, David Chilton Phillips的实验室得到第一个酶（溶菌酶）的X-衍射3D结构。 1982年，Cech首次发现RNA也具有酶的催化活性，提出核酶(ribozyme)的概念（获1989年诺贝尔化学奖）。 1995年，Jack W.Szostak研究室首先报道了具有DNA连接酶活性DNA片段，称为脱氧核酶(deoxyribozyme)。 长期以来认为所有酶都是蛋白质，直到1982年， Thomas Cech and Sydney Altman首次发现RNA也具有酶的催化活性，提出核酶(ribozyme)的概念（获1989年诺贝尔化学奖）。 RNA 世界假说：生命进化的早期，没有蛋白质（酶），某些RNA可以催化RNA的复制——也就是说RNA是唯一的遗传物质，是生命的源头。 又称为内切酶或限制酶，是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶，是体外剪切基因片段的重要工具。可分为Ⅰ、Ⅱ、III型三大类， Ⅱ类限制酶基本特点如下： (1) 专一性地识别并切割特定的核苷酸序列 (2) 识别的核苷酸数目大多数为4～6个； (3) 识别序列大多数为二重对称（回文序列），大多数酶产生的是具有凸出的粘性末端. 单体酶(monomeric enzyme)：仅具有三级结构的酶。 寡聚酶(oligomeric enzyme)：由多个相同或不同亚基以非共价键连接组成的酶。 多酶体系(multienzyme system)：由几种不同功能的酶彼此聚合形成的多酶复合物。 多功能酶(multifunctional enzyme)或串联酶(tandem enzyme)：一些多酶体系在进化过程中由于基因的融合，多种不同催化功能存在于一条多肽链中，这类酶称为多功能酶。 同工酶 (isoenzyme)：催化相同的化学反应，而酶蛋白的分子结构理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。 根据国际生化学会的建议，同工酶是由不同基因编码的多肽链，或由同一基因转录生成的不同mRNA所翻译的不同多肽链组成的蛋白质。 同工酶存在于同一种属或同一个体的不同组织或同一细胞的不同亚细胞结构中，它使不同的组织、器官和不同的亚细胞结构具有不同的代谢特征。这为同工酶用来诊断不同器官的疾病提供了理论依据。 （一）酶促反应具有极高的效率 在反应前后没有质和量的变化； 只能催化热力学允许的化学反应； 只能加速可逆反应的进程，而不改变反应的平衡点。 酶促反应动力学：研究各种因素对酶促反应速率的影响，并加以定量的阐述。 影响因素包括：酶浓度、底物浓度、pH、温度、抑制剂、激活剂等。 在其他因素不变的情况下，底物浓度对反应速率的影响呈矩形双曲线关系。 单底物、单产物反应； 酶促反应速率一般在规定的反应条件下，用单位时间内底物的消耗量和产物的生成量来表示； 反应速率取其初速率，即底物的消耗量很小（一般在5﹪以内）时的反应速率 底物浓度远远大于酶浓度。 中间产物（过渡态） ES的生成速率 = ES的分解速率 Km值的推导 Km与Vmax的意义 定义：Km等于酶促反应速率为最大反应速率一半时的底物浓度。 意义： Km是酶的特征性常数之一，只与酶的结构、底物和反应环境（如，温度、pH、离子强度）有关，与酶的浓度无关。 Km可近似表示酶对底物的亲和力； 同一酶对于不同底物有不同的Km值。 Vmax 酶的催化效率可用酶的转换数 (turnover number) 来表示。酶的转换数是指在酶被底物饱和的条件下，每个酶分子每秒钟将底物转化为产物的分子数。 在酶促反应系统中，当底物浓度大大超过酶的浓度，酶被底物饱和时，反应速率达最大速率。此时，反应速率和酶浓度变化呈正比关系。 当[S]＞＞[E]，酶可被底物饱和的情况下，反应速率与酶浓度成正比。 关系式为：V = k3 [E] 温度对酶促反应速率具有双重影响。 酶促反应速率最快时反应体系的温度称为酶促反应的最适温度(optimum temperature)。 酶催化活性最高时反应体系的pH称为酶促反应的最适pH (optimum pH)。 最适pH不是酶的特征性常数，它受底物浓度、缓冲液种类与浓度、以及酶纯度等因素的影响。 酶的抑制剂(inhibitor) 抑制剂通常以非共价键与酶或酶-底