专业实验讲义-to生工芦丁.docVIP

§8.4芦丁的提取、水解掌握和方法掌握黄酮类化合物的一般鉴别原理及方法 §8.4.2实验原理 槐花米为一常用中药，为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾，自古作为止血药，具有清肝泻火、治疗肝热目赤、头痛眩晕的功效，治疗子宫出血、吐血、鼻出血。槐花米中主要含有黄酮类成分，其中芦丁的含量高达12-20%，另含有少量的皂苷。 芦丁亦称芸香苷，有减少毛细血管通透性的作用，临床上主要为防治高血压的辅助治疗药物，此外芦丁对于放射线伤害所引起的出血症亦有一定作用。其广泛存在于植物中，现已发现含有芦丁的植物有70多种，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，可作为提取芦丁的原料。 槐花米中已知主要成分的结构和性质： 芦丁（rutin）：C27H30O6?3H2O淡黄色针状结晶，（25℃）Mp：177~178℃，无水物的Mp：188-190℃，214~215℃ 发泡分解。溶解度：热水（1：200），冷水（1：8000），热乙醇（1：30），冷乙醇（1：300），微溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等溶剂。易溶于碱液，呈黄色，酸化后又析出，可溶于硫酸和盐酸，呈棕黄色，加水稀释又可析出。 槲皮素（quercetin）：C15H10O7?2H2O黄色结晶，Mp：313~314℃，无水物的Mp：316℃，溶解度：热乙醇（1：23），冷乙醇（1：290），可溶于吡啶、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、冰醋酸等溶剂，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚和水。 本实验是利用芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，在碱水中成盐增大溶解能力，用碱水为溶剂煮沸提取，提取液加酸酸化后又成为游离的芦丁而析出，利用芦丁对冷水和热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制，并通过纸色谱法进行检识。 §8.4.3试剂与仪器 试剂： 硼砂、槐花米、石灰乳、尼泊金、蒸馏水、正丁醇、醋酸、乙醇、三氯化铝。 仪器： 烧杯、新华层析滤纸、纱布、电炉、圆底烧瓶、三角烧瓶、玻棒、电子天平、抽滤瓶、布氏漏斗、真空泵、分液漏斗。 §8.4.4实验步骤 1.取槐花米20g，置于500mL烧杯中，加0.4%硼砂水沸溶液200mL。在搅拌下以石灰乳调至pH8-9，加热微沸30分钟，补充失去的水份，并保持pH8-9，倾出上清液，用4层纱布过滤、重复提取一次。合并滤液，将滤液用6N盐酸调pH5左右，放置析晶，过夜。 2.抽滤用水洗3-4次，放置空气中自然干燥得粗芦丁，称重。 3.取粗芦丁2g，加400mL蒸馏水，煮沸至芦丁全部溶解，趁热立即抽滤，放置冷却。冷却后即可析出结晶，抽滤得芦丁精制品。 4.三氯化铝纸片反应：在一张滤纸条上滴加芦丁醇溶液后，加1％三氯化铝乙醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记录现象。 5.芦丁的纸色谱鉴定 层析材料：新华层析滤纸 点 样：提取所得芦丁的乙醇溶液和芦丁标准品的乙醇溶液 展 开 剂：正丁醇：醋酸：水(4：1：5)上层溶液 展开方式：预饱和后，上行展开 显 色：喷三氯化铝试剂前后，置日光及紫外光灯(365nm)下检视色斑的变化 §8.4.5注意事项 1.精制时一定要趁热抽滤。 2.用石灰乳调节pH时，要小心，不能太高或太低。 3.重结晶时，若结晶色泽呈灰绿色或暗黄色，表示杂质未除尽。 §8.4.6实验结果与讨论 1.记录实验条件、现象、图谱、斑点颜色、各试剂用量及产品芦丁的质量。 2.产品为浅黄色晶体。 3.计算芦丁的理论产量和实际得率。 §8.4.7思考题 1.黄酮类化合物还有那些提取方法？ 2.芦丁的提取还可以用哪些方法？ 3.如果产品的实际得率不高，可能的原因是什么？