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如何选购多功能酶标仪——Biotek 给您答案 基因有限公司 酶标仪是生物科学研究领域中不可或缺的重要研究工具，基本上每个实验室都或多或少 的用到酶标仪的一些功能。多功能酶标仪的应用主要分吸收光检测，荧光检测和发光检测三 大方面，实验者可依据不同的实验检测手段选择不同功能的酶标仪。随着科技的日新月异， 实验者的研究领域越来越宽，研究手段也越来越广。现在，分子生物学和细胞生物学等先进 的主流技术手段已经广泛的被应用在各个研究领域。单一的酶标功能已经很难满足实验者的 实验要求，很多实验室是吸收光，荧光和发光都要使用的。从仪器的利用率以及实验室空间 的角度考虑，多功能酶标仪已经成为实验者酶标仪购买中的首选。从搭建一个实验室平台的 角度来看，多功能酶标仪也是实验者的不二选择。 目前市场上的多功能酶标仪可谓是琳琅满目、型号众多，是否让您挑的眼花缭乱呢？我 们关注多功能酶标仪最重要的特点就是灵敏度、结果的准确性、重复性、应用拓展。这些特 点及功能与多功能酶标仪的硬件、光路设计是相辅相成的。下面我们就来介绍一下多功能酶 标仪的几大应用，即吸收光、荧光、发光、基于荧光光路的荧光偏振、时间分辨荧光对仪器 硬件及光路的要求。 一、吸收光： 光源：由于吸收光涉及需要覆盖紫外区，可见光区和红外区，所以作为光源一定要是全光谱 的激发光源，氙灯就成为其最佳选择（图一）。 波长选择：待测物质各自有各自的吸收峰，这就决定的波长选择的多样性。在研究人员工作 过程中，几十种上百种的吸收光波长选择也并不稀奇。要是再加上有时候为了寻找样本的吸 收峰而进行光谱全波长扫描的时候，滤光片很明显满足不了吸收光的研究。所以好的吸收光 酶标仪都是采用单色器（光栅）作为波长选择元件。 带宽：由于溶液中成分较多，而吸收光的灵敏度有限，所以如何避免干扰也是要考虑的。这 样就要控制单色器（光栅）的带宽，带宽越窄，实验结果的特异性越好。 二、荧光检测： 光源：荧光染料绝大部分都是在可见光范围内，而在可见光范围内，卤钨灯的激发能量要远 远高过氙灯。此外，氙灯是闪烁光源，在需要稳定激发的荧光检测上是不太适合的。在荧光 应用较广的定量 PCR 领域，几乎没有采用氙灯作为光源的就有力的证明了这一点（图一）。 但是氙闪灯所产生的脉冲光是时间分辨荧光所必须的，所以好的荧光检测光路最好同时配卤 素灯和氙闪灯，以达到每种检测模式都可以得到最好的检测结果。 波长选择：荧光染料的检测灵敏度取决于激发和发射光源的透过效率。从本质上讲，滤光片 的光透过率是单色器（光栅）的4 倍以上（滤光片65%， 单色器15%）。虽然单色器在波长 选择上更加方便和灵活，但是和吸收光不同的是，荧光检测检测的是染料而非待测样本。也 就是说待测样本也许可以有无数种，但是实验者都可以用一种或者少数几种染料进行标记。 波长的选择主要是针对染料，这也是目前主流的定量PCR 仪仅仅需要2-4 个检测通道就足以 满足实验者所有应用的原因。 基于荧光光路的荧光偏振在检测光路上需要起偏器、偏振片，而单色器（光栅）系统 是无法添加这样的光学元件的，因此，只有滤光片系统可以完成荧光偏振的检测。 带宽：与吸收光模式不同，荧光染料的发射光都很强，其他成分的干扰很小，因此能否透过 更多的光也是决定仪器灵敏的因素。在染料的激发和发射峰形上能截取到更大的峰面积也成 为必要条件。单色器的带宽通常是固定的16nm，比较窄，滤光片5-100nm 可选的带宽是强 过单色器的，根据滤光片对荧光染料的波长特异性，使用相应的滤光片则代表着使用了最适 宜的带宽，在保证特异性的前提下最大化的提高检测灵敏度。灵敏度的提高同时也意味着试 剂的节省，因为要达到同样效果可以采用更少的实验体系。 图一 氙灯和卤钨灯光谱图 图二 滤光片与单色器在带宽上的不同对光透过的影响 所以，荧光检测模式的最佳光路选择是卤钨灯+滤光片系统。但是，如果您是从事研发， 或者是特殊的实验要求，比如是开发荧光染料，需要通过荧光光谱扫描来确认染料的激发或 发射峰的位置，则需要使用卤钨灯/高能氙灯+单色器（光栅）系统。 三、发光检测 发光检测不需要光源，采用光纤作光信号传道，液导光纤比石英光纤灵敏度更高。通常 发光实验需要快速检测，比如BRET （生物发光共振能量转移），就需要使用注射器进行加样 后立刻检测，同时需要两个波长间得快速切换完成双波长的检测。因此采用滤光片配合液导 光